系统研究了流动相中盐的性质和浓度、溶液pH以及竞争配体对蛋白质在金属螯合色谱中保留值的影响.导出了描述蛋白质在金属螯合色谱中保留特征的数学表达式,提出用洗脱强度指数ε表征盐溶液的洗脱能力.根据不同色谱条件下蛋白质的保留特性,发现蛋白质在金属螯合色谱中的保留是配位、静电和疏水的协同作用.对与蛋白质强结合的金属螯合柱,以配位作用为主,静电作用为辅;对弱结合的金属柱,以静电作用为主,配位作用为辅.在流动相中加入高浓度非成络盐,可增强蛋白质和固定相间的疏水作用.利用金属螯合配体和蛋白质间的作用力与色谱条件的相关性,对不同类型金属螯合柱可选择不同的洗脱方式.对弱结合的金属螯合柱可用低浓度盐或pH梯度洗脱,对强结合的金属螯合柱通常用竞争洗脱剂洗脱.实验证明,NH3是一种优秀的竞争洗脱剂,它不仅效能高,而且价廉,固定金属流失少,浓度易控制.改变色谱条件可改变金属螯合配体和蛋白质间的作用力,提高金属螯合色谱的选择性.
参考文献
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