在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸(PO-ODNs)及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸(PS-ODNs)药物"癌泰得"系列样品(18～20 mers)进行分离,并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电压、温度等因素对样品单碱基分离的影响.其中缓冲溶液的pH对分离起决定性的作用,而添加剂尿素的加入显著提高了PS-ODNs样品的分离度.结果表明,采用未涂层弹性石英毛细管(50 μm,总长49.0 cm,有效长度40.7 cm),以50 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸(pH 2.24)-7 mol/L尿素为缓冲溶液,压力进样(2 kPa×10 s),负极进样,正极检测,在分离电压-20 kV、柱温25 ℃、检测波长260 nm条件下,可实现寡核苷酸及硫代反义寡核苷酸混合样品的单碱基分离.PO-ODNs的18～19 mers及19～20 mers样品的平均分离度分别为4.68,3.20;PS-ODNs的18～19 mers及19～20 mers样品的平均分离度分别为1.23及0.81.该法操作简单,重现性好,可为反义寡核苷酸药物的分析提供借鉴.
参考文献
| [1] | Li Y,Chen S S,Wang W C.Genetically Engineered Pharmaceutics.Beijing:Chemical Industry Press (李元,陈松森,王渭池.基因工程药物.北京:化学工业出版社),2002:257 |
| [2] | Zhang W,Yang B H,Liang Q D,Lu D D,Lin R X,Wang S Q.Chinese Journal of Chromatography (张嵬,杨秉呼,梁乾德,鲁丹丹,林汝仙,王升启.色谱),2005,23(4):374 |
| [3] | De Bellis G,Salani G.Anal Chim Acta,1997,345:1 |
| [4] | Perego M,Gelfi C,Stoyanov A V,Righetti P G.Electrophoresis,1997,18:2 915 |
| [5] | Mangano M F,Battaglia C,Salani G,Bernardi L R,Bellis G D.J Chromatogr A,1999,848:435 |
| [6] | Pietta P G,Mangano M F,Battaglia C,Salani G,Bernardi L R,De Bellis G.J Chromatogr A,1999,853:355 |
| [7] | Yang B H,Guan W,Wang S Q.Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology (杨秉呼,管伟,王升启.中国生物化学与分子生物学报),2001,17(2):250 |
| [8] | Fu R N.General of Chromatographic Analysis.2nd ed.Beijing:Chemical Industry Press (傅若农.色谱分析概论.第2 版.北京:化学工业出版社),2005:225 |
| [9] | Wang Jingyan.Biological Chemistry.3rd ed.Beijing:High Education Press (王镜岩.生物化学.第3版.北京:高等教育出版社),2002:478 |
| [10] | He J L.Chemistry (何金兰.化学通报),2000,63(6):53 |
| [11] | DeDionisio L A,Lloyd D H.J Chromatogr A,1996,735:191 |
| [12] | Cordier Y,Roch O,Cordier P,Bischoff R.J Chromatogr A,1996,680:479 |
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