糖蛋白结构质谱解析的样品前处理

色谱 , 2007, 25(5): 623-627. doi: 10.3321/j.issn:1000-8713.2007.05.004

糖蛋白结构质谱解析的样品前处理

周玮 ^1, , 刘晓慧 ^2, , 周新文 ^3, , 申华莉 ^4, , 杨芃原 ^5,

1.复旦大学生物医学研究院,上海,200032

2.复旦大学生物医学研究院,上海,200032

3.复旦大学生物医学研究院,上海,200032

4.复旦大学生物医学研究院,上海,200032

5.复旦大学生物医学研究院,上海,200032

基金项目: 国家高技术研究发展计划(863计划)(2002BAC11A11;2004BA711A19)

关键词：糖蛋白结构 , 质谱解析 , 样品前处理 , 条件优化

Sample Pre-Processing for Mass Spectrometric Analysis of Glycoprotein Structure

基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱,以标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)、核糖核酸酶B(RNase B)为对象,探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程.通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤(包括蛋白变性方法(RNase B适合化学变性,HRP适合热变性)、酶的选择及条件(RNase B适用内蛋白酶Lys-C酶解,HRP适用胰蛋白酶酶解,酶解时间控制在12～16 h)、提肽液的组成(对于低丰度糖蛋白用50%乙腈-5%三氟乙酸提取)、基质的组成、点样方法("三明治"式))进行了优化,形成了简单易行、无需糖肽富集标记的糖蛋白溶液酶解-质谱分析和胶上分离酶解-质谱分析的技术路线,为实际样品体系中糖蛋白的结构解析提供了可行的方法.

参考文献

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