天冬酰胺合成酶B抑制剂高效液相色谱筛选方法的建立与应用

色谱 , 2009, 27(4): 472-475. doi: 10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.018

天冬酰胺合成酶B抑制剂高效液相色谱筛选方法的建立与应用

张继 ^1, , 于丹 ^2, , 向文胜 ^3, , 范志金 ^4, , 王相晶 ^5,

1.东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030

2.东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030

3.东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030

4.南开大学元素有机化学研究所,天津,300071

5.东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030

基金项目: 南开大学元素有机化学国家重点实验室十六期、十七期开放基金国家自然科学基金(30440046)

关键词：高效液相色谱法 , 天冬酰胺合成酶B , 抑制剂 , 筛选

Development and application of screening method for asparagine synthetase B inhibitors by high performance liquid chromatography

建立了一种快速、高效测定天冬酰胺合成酶B(AS-B)酶活性的反相高效液相色谱法(RP-HPLC).酶反应体系中的氨基酸经 2,4-二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生,通过RP-HPLC测定酶反应体系前后底物及产物的变化来分析酶的活性.采用的色谱柱为Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以50 mmol/L 醋酸钠缓冲液(pH 6.2)-乙腈(体积比为15∶85)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,检测波长365 nm,于 6 min 内实现了各组分的基线分离.通过该方法测定反应动力学参数进行AS-B的抑制定量分析.将已知AS-B抑制剂L-谷氨酸-γ-甲酯作用于酶反应体系,测得的抑制剂的抑制常数与文献值相接近,证明该方法可用于AS-B抑制剂的筛选.

参考文献

[1]	Romagni J G,Duke S O,Dayan F E.Plant Physiol,2000,123(2):725
[2]	Su N,Pan Y X,Zhou M,et al.Pediatr Blood Cancer,2008,50(2):274
[3]	Gutierrez J A,Pan Y X,Koriniak L,et al.Chem Biol,2006,13(12):1 339
[4]	Ren H P,Liu J.Antimicrob Agents Chemother,2006,50(1):250
[5]	Luehr C A,Schuster S M.J Biochem Biophys Methods,1980,3(3):151
[6]	Romagni J G,Dayan F E.J Agric Food Chem,2000,48(5):1 692
[7]	Ciustea M,Gutierrez J A,Abbatiello S E,et al.Arch Biochem Biophys,2005,440(1):18
[8]	Unnithan S,Moraga D A,Schuster S M.Anal Biochem,1984,136(1):195
[9]	Li K K,Beeson W T,Ghiviriga I,et al.Biochemistry,2007,46(16):4 840
[10]	Yan D R,Zhang J A,Cui C L,et al.Modern Scientific Instruments (阎大任,张静安,崔成来,等.现代科学仪器),2005(1):46
[11]	Li M,Yang Z X,Xie B,et al.Chinese Journal of Chromatography (李梅,杨朝霞,解彬,等.色谱),2007,25(6):939
[12]	Zhao S L,Shen J S.Chemical Journal of Chinese Universities (赵书林,沈江珊.高等学校化学学报),2005,26(9):1 613
[13]	Tcherkas Y V,Kartsova L A,Krasnova I N.J Chromatogr A,2001,913(1/2):303
[14]	Wan S H,Yang H,Geng X M.Chinese Journal of Chromatography (万绍晖,杨浩,耿秀梅.色谱),2005,23(4):408
[15]	Fresquet V,Thoden J B,Holden H M,et al.Bioorg Chem,2004,32(2):63
[16]	Boehlein S K,Stewart J D,Walworth E S,et al.Biochemistry,1998,37(38):13 230

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