为了获得一种优良的抗体纯化介质,制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白A( rProtein A)亲和填料,并考察了所制备的亲和填料的纯化性能.利用自行构建的rProtein A工程菌,经诱导表达、纯化获得rProtein A纯品,将其偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 4 Fast Flow凝胶上,得到rProtein A亲和填料,并使用兔抗尿酸氧化酶抗体对该填料的性能进行验证.结果显示,在自制的rProtein A亲和填料上rProteinA浓度为1.5×10-4 mol/L.采用Scatchard模型分析,得到其解离常数和最大表观吸附量分别为2.28×10-7 mol/L和20.697 g/L,说明制得的rProtein A亲和填料对抗体有很好的结合能力.将该填料于0.1 mol/L NaOH溶液中浸泡1h,其色谱性能未见变化.将该填料用于纯化兔抗体,湿胶结合抗体量可达19 mg/mL；一步柱色谱即可得到电泳纯度的抗体样品,回收率高于96％.本研究为rProteinA亲和填料的国产化奠定了基础.
参考文献
| [1] | Li Z H,Yue Y Y,Li P,et al.Journal of Shandong University:Health Sciences(李志会,岳盈盈,李鹏,等.山东大学学报:医学版),2009,47(10):28 |
| [2] | Fuglistaller P.J Immunol Meth,1989,124:171 |
| [3] | Yang H,Gurgel P V,Carbonell R G.J Chromatogr A,2009,1216:910 |
| [4] | Low D,O'Leary R,Pujar N S.J Chromatogr B,2007,848:48 |
| [5] | Tang J J,Li X B,Liu G W,et al.China Animal Husbandry & Veterinary Medicine(唐佳佳,李小兵,刘国文,等.中国畜牧兽医),2011,38(2):76 |
| [6] | Naik A D,Raina M,LaliA M.J Chromatogr A,2011,1218:1756 |
| [7] | Padilla S,Alvarez T,Ferro W,et al. Chromatographia,2010,72:121 |
| [8] | Agostino B D,Bellofiore P,Martino T D,et al.J Immunol Meth,2008,333:126 |
| [9] | Jeong Y J,Kang H J,Bae K H,et al.Peptides,2010,31:202 |
| [10] | Shi Q H,Peng G Y,Sun S,et al.The Chinese Journal of Process Engineering(史清洪,彭冠英,孙舒,等.过程工程学报),2007,7(4):743 |
| [11] | Pharmacia Biotoch A B.US,6399750.2002-6-4 |
| [12] | Mao W X.[MS Dissertation].Changchun:Jilin University (毛未贤.[硕士学位论文].长春:吉林大学),2010 |
| [13] | Feng H Q,Jia L Y,Li H L,et al.Biomed Chromatogr,2006,20:1109 |
上一张
下一张
上一张
下一张
计量
- 下载量()
- 访问量()
文章评分
- 您的评分：
-
10%
-
20%
-
30%
-
40%
-
50%