增强型绿色荧光蛋白(EGFP)是生物领域常用的标记物.在前期成功克隆表达EGFP的基础上,本实验建立了两步分离纯化EGFP的色谱方法,并验证其分离纯化效果,检验EGFP的活性.首先用金属螯合亲和色谱柱HisTrap HP对EGFP的重组菌体破碎上清液进行初步分离,再用葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephadex G-10 HR对其进行脱盐纯化.采用丙烯葡聚糖凝胶排阻色谱柱Sephacryl S-300 HR和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分离纯化后的EGFP纯度.最后通过荧光分光检测器和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(NativePAGE)验证分离纯化后的EGFP是否具有荧光活性.结果表明该方法可以简便快速地分离纯化EGFP,纯度超过98％,同时保持了EGFP的荧光活性.
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