利用一步法和两步法毛细管等电聚焦(clEF)方法分离测定了蛋白质和多肽的等电点(pI).讨论了两步法等电聚焦过程所需的溶液组成、样品进样体积、聚焦电压、聚焦时间和分离条件等因素对分离效果的影响.并对一步法和两步法进行了比较.对细胞色素C、血红蛋白、肌红蛋白、转铁蛋白和牛血清白蛋白以及6种多肽的分析结果表明:一步法步骤简单,分离速度快,可测定单一组分的pI,也能快速分离混合蛋白和多肽,但分离度较差,且不能同时准确测定各组分的pI;两步法步骤复杂,分析时间较长,但能够同时分离并准确测定混合样品中各组分的pI,所测的pI值与单一组分进行测定的结果基本一致.两种方法可相互结合、互为补充,可广泛应用于两性生物微粒等电点的快速和准确测定.
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