建立了高效液相色谱(HPLC)同时测定尿液中4种常见的非蛋白氮物质——肌酸(Cr)、尿肌酐(Cn)、尿酸(Ua)及假尿嘧啶核苷(Pu)含量的方法.尿液首先经丙酮沉淀法除去大分子化合物,然后冷冻干燥,复溶后直接进行HPLC分析.色谱分离选用Waters RP18 Column(150 mm×4.60 mm,3.5 μm),以10.0 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH 4.78)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,于220 nm波长下检测,可在7 min内完成4种非蛋白氮的快速分离分析.结果表明Cr、Cn、Ua、Pu在0.1~250 mg/L范围内线性关系均良好(相关系数均大于0.999),检出限分别为9.31、26.19、4.70、6.30 μg/L,加标回收率为81% ~ 111%,峰高的相对标准偏差(RSD,n=3)为0.23%~ 2.78%,满足定量要求.该法简便、快速,结果准确可靠,为2型糖尿病(T2DM)患者肾功能损坏的研究提供了检测手段.
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