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两步柱色谱法分离纯化重组猪β2-肾上腺素能受体

徐立华 , 王世祥 , 郑晓晖 ,

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00374

β2-肾上腺素能受体是细胞表面受体的一种,它能通过偶联异源三聚体G蛋白将信号转导引入到细胞内部.本实验在成功克隆、表达β2-肾上腺素能受体的基础上,建立了一种两步柱色谱分离纯化目的蛋白质的方法.首先利用Ni2+螯合的高分辨纯化的预带电荷介质Sepharose High Performance与含有聚组氨酸标签的蛋白质特异结合的性质,对目的蛋白质进行初步分离,接着运用快流速Q琼脂糖凝胶(Quaternary Sepharose Fast Flow)对其进行进一步的分离纯化.采用该方法得到的β2-肾上腺素能受体蛋白质经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效凝胶排阻色谱检测其纯度约为95%.结果表明该方法可以对重组猪β2-肾上腺素能受体进行有效的分离纯化.

关键词: 柱色谱 , 分离 , 纯化 , β2-肾上腺素能受体

两步柱色谱法分离纯化重组肿瘤血管生长抑制因子Kringle 5

贾信贵 ,

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.03.012

建立了一种用Ni2+螯合的Chelating Sepharose Fast Flow亲和柱色谱和Sephadex G-75凝胶排阻柱色谱分离纯化重组肿瘤血管生长抑制因子Kringle 5的方法.采用该工艺得到的重组Kringle 5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其纯度约为98%,且具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成的生物活性.

关键词: 亲和柱色谱法 , 凝胶排阻柱色谱法 , 重组血管生长抑制因子 Kringle 5 , 分离 , 纯化

从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白

周勃 ,

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.03.025

为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱方法,对纯化后的猪血红蛋白进行了鉴定.经三步分离纯化后,猪血红蛋白的纯度大于99% ,含量为1.328 g/L.

关键词: 超滤 , 阴离子交换色谱 , 凝胶排阻色谱 , 猪血红蛋白 , 分离 , 纯化

一种从蛇毒中纯化神经生长因子的新工艺

吴鹏 , 杨晓燕 ,

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.01.001

为了能从中华眼镜蛇蛇毒中简单快速地分离纯化神经生长因子(一种治疗各种神经性损伤和神经退行疾病的药物,简称NGF),采用不同的色谱柱联用的方式对NGF的纯化工艺进行了研究.结果表明,采用DEAE-Sepharose F.F.和Sephadex G-50二步柱色谱工艺可以从蛇毒中快速分离得到神经生长因子.经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高效液相色谱分析, 证明所得到的NGF为单一组分,相对分子质量约为29 000.对8 d龄鸡胚背根神经节采用体外培养法,结果证明,所得NGF具有明显的促进神经纤维生长的生物活性.

关键词: 阴离子交换色谱 , 凝胶排阻色谱 , 神经生长因子 , 中华眼镜蛇蛇毒 , 分离 , 纯化

体积排阻色谱法研究变性溶菌酶分子复性过程中集聚体的形成

, 杨晓燕 , 刘莉

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.02.003

在体积排阻色谱柱上研究了还原剂存在时脲和盐酸胍变性的3种溶菌酶溶液的复性和分离过程.当变性液中原始溶菌酶浓度大于10 g/L时,变性溶菌酶在体积排阻色谱柱上除了复性为与未变性溶菌酶出峰时间相同的复性态溶菌酶分子外,还形成了溶菌酶折叠中间体的二分子集聚体.这个结果得到了用稀释法复性时溶菌酶的蛋白电泳检测结果的支持.与稀释法复性相比较,用体积排阻色谱法复性时所形成的折叠中间体二分子集聚体的量要远远低于用稀释法所形成的集聚体的量.

关键词: 体积排阻色谱法 , 溶菌酶 , 复性过程 , 集聚体

三步柱色谱法从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化类凝血酶

, 杨晓燕 , 刘莉

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.02.006

建立了一种用CM Sepharose CL-6B阳离子交换、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换和Sephadex G-75凝胶排阻三步柱色谱从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化类凝血酶的方法.在实验室小柱分离方案的基础上,对该纯化工艺进行了放大.当上样量达实验室小柱的25倍时,所得类凝血酶的质量指标与实验室小柱基本一致.采用该法所得的蝮蛇类凝血酶经Shim-pack Diol-300高效凝胶排阻柱测得其相对分子质量约为33 500,用Shim-pack VP-ODS反相色谱柱检测其纯度约为96% .从江浙粗蛇毒中提取类凝血酶时,类凝血酶的总质量收率约为0.3% ,总活性收率约为64% ,比活可达2 000 U/mg.

关键词: 三步柱色谱 , 类凝血酶 , 蛇毒 , 江浙蝮蛇 , 分离纯化

基因重组可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的色谱分离和纯化

马丽娜 , 吴丹 ,

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2012.03022

Kringle 5是血纤维蛋白溶酶原中特异抑制内皮细胞增生和迁移活性最高的一种血管生成抑制剂.该实验在前期成功克隆和表达可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5的基础上,建立了一种两步色谱法分离纯化Kringle5的方法.首先用SP Sepharose Fast Flow强阳离子交换色谱柱对Kringle 5重组菌体破碎上清液进行初步分离,然后再用丙烯葡聚糖凝胶S-100 HR凝胶排阻色谱柱对其进行进一步的纯化.采用本方法得到的可溶性非融合血管生成抑制剂Kringle 5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶排阻色谱检测其纯度大于98%,通过鸡胚尿囊膜法确定这种蛋白质具有抑制内皮毛细血管生长的活性.

关键词: 阳离子交换色谱 , 凝胶排阻色谱 , 血管生长抑制剂Kringle 5 , 分离 , 纯化

六边形多孔NiO纳米片的合成与表征

赵金博 , 吴莉莉 , 吴佑实 , 邹科 , 傅佩珍

人工晶体学报

以硫酸镍和次甲基四胺为原料,采用水热法制备出粒径约为90 nm的六边形Ni(OH)2纳米片,再将Ni(OH)2纳米片煅烧得到多孔六边形NiO纳米片.通过 X射线衍射(XRD)、透射电镜(TEM)等测试手段对所得产物物相和形貌进行了表征.结果表明,多孔六边形NiO纳米片属于方晶系,孔径约为15 nm.研究发现,通过调节反应物的浓度即可以在无模板的情况下控制产物为多孔六边形或刺球形NiO纳米晶.根据实验结果,本文提出了不同形貌NiO的形成机理.

关键词: 纳米片 , 多孔 , NiO , 水热法

六边形板式换热器传热和流动特性研究

宋继伟 , 张士虎 , 王飞 , 曹兴 , 杜文静 , 程林

工程热物理学报

本文研究了一种具有球面肋的正六边形板式换热器,分别对其两流体和三流体换热的情况进行数值模拟,讨论了其在顺流和逆流状态下的性能.与60°的人字形板式换热器进行比较,正六边形板式换热器在单位压降下的综合传热性能较优.本文还拟合了传热准则方程式和摩擦系数方程式.结果表明,该种新型板式换热器结构紧凑,布置灵活,具有好的综合传热性能.分析认为球面肋提高了局部场协同的程度.

关键词: 板式换热器 , 球面肋 , 场协同

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