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麦胚凝集素亲和色谱富集糖肽过程中的肽键裂解

卢庄 , 王京兰 , 贾伟 , 杨兵 , 蔡耘 , 玉林 , 张玉奎 , 钱小红

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.01.003

蛋白质的糖基化是最重要的翻译后修饰之一,与蛋白质结构和功能的关系密切.凝集素亲和色谱是蛋白质糖基化研究中很常用的工具,不同的凝集素可以对不同的单糖或寡糖有特异的富集作用.麦胚凝集素(WGA)由于其特异作用的糖型广泛存在而成为使用最多的凝集素之一.在本研究中,发现将WGA用于糖肽亲和富集会导致部分肽段的降解,从而导致后续的肽段序列分析的失败.本文用4种标准蛋白质对这种现象进行了验证,结果表明肽段的降解可以发生在多个位点,其中较多地发生在酪氨酸、苯丙氨酸及亮氨酸的羧基端.这一结果提示:在糖蛋白质组研究中,如果应用WGA富集糖肽并采用质谱进行鉴定,则采用半酶切或非特异性酶切的检索策略更为合适.

关键词: 麦胚凝集素亲和色谱 , 糖肽 , 肽键 , 断裂 , 蛋白质组学

新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料的合成及其在蛋白质N-糖链富集中的应用

白海红 , 范超 , 沈丙权 , 田芳 , 玉林 , 潘一廷 , 秦伟捷 , 钱小红

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2014.11022

蛋白质的 N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质,且糖链结构具有高度微不均一性,这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合( SI-ATRP )法,以带有双键的氨基葡萄糖为单体(GMAG),成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料(pGMAG-SiO2)。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层,该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度,而且显著提高了其亲水性,因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象,考察了该填料对N-糖链的富集效果,并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白 N-糖链的富集检测,共鉴定了47种糖型。以上结果表明,pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性,可以用于 N-糖链的高覆盖率鉴定。

关键词: 表面引发-原子转移自由基聚合反应 , 核壳型硅胶填料 , N-糖链 , N-糖基化蛋白质

制备方法对魔芋葡甘聚糖溶解速率的影响

马建龙 , 戴荣继 , 潘琳 , 禹玉洪 , 孟薇薇 , 纪媛媛 , 玉林

高分子材料科学与工程

采用乙醇研磨法和水溶醇沉法制备魔芋葡甘聚糖,研究了两种方法对魔芋葡甘聚糖纯度、表现黏度、黏均分子量及溶解性能的影响,结果表明,水溶醇沉法制备的魔芋葡甘聚糖,其纯度、表现黏度、黏均分子量与乙醇研磨法基本相同,但溶解速率差异显著,从26.4 mg/mL·h下降到10 mg/mL·h.用红外光谱,X射线衍射,扫描电镜等方法表征了魔芋葡甘聚糖的结构,结果表明,乙醇研磨法对葡甘聚糖形态及微观结构几乎没有影响,能保留魔芋葡甘聚糖固有的性能,而水溶乙醇沉淀法由于使其分子链发生伸展、重排、卷曲、相互缠绕交织等,其表面形态和聚集态结构发生了变化,从而魔芋葡甘聚糖的溶解速率明显降低.

关键词: 魔芋 , 魔芋葡甘聚糖 , 高分子杂多糖

基于固定化pH梯度整体材料的芯片自由流等电聚焦电泳模式的构建

韩彬 , 王平利 , 张丽华 , 屈锋 , 梁振 , 玉林 , 张玉奎

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.001

芯片自由流电泳对于来源稀少的重要生物样品的连续预分级和微制备具有重要的意义.本文在自由流芯片的微分离腔内,通过原位光引发聚合反应制备了聚丙烯酰胺整体材料,并进行了pH梯度的固定化,从而构建了基于固定化pH梯度整体(M-IPG)材料的芯片自由流等电聚焦模式(μFF-IEF).利用该新型分离模式,实现了异硫氰酸荧光素(FITC)标记的最小等电点相差0.33的甘氨酸、脯氨酸和赖氨酸混合物的分离,且分离结果优于传统的μFF-IEF.实验结果表明,通过发展基于M-IPG材料的μFF-IEF模式,不仅可以避免在缓冲溶液中添加两性电解质对后续采用其他模式分离和质谱鉴定的干扰,而且可以获得较高的分离和富集能力,有望在微量样品的连续分离和制备方面发挥重要作用.

关键词: 芯片自由流电泳 , 等电聚焦 , 固定化pH梯度 , 整体材料 , 氨基酸

CoFe2O4纳米微粉的制备及磁性

张变芳 , 唐贵德 , 王振彪 , 刘虎 , 杜伟胜 , 玉林

功能材料

以FeCl3和CoCl2为原料,制备出颗粒细小的CoFe2O4纳米微粉,利用X射线衍射确定了粉体的组成,利用振动样品磁强计测量了室温下粉体的磁性能,利用扫描电子显微镜观察了颗粒的形貌.

关键词: 制备 , 纳米微粉 , 磁性能 , 铁氧体

中空纤维膜超滤技术在百蕊草水提液中的研究

刘洋 , 玉林 , 徐志慧 , 戴荣继 , 禹玉洪

功能材料

研究了聚偏氟(PVDF)及聚砜(PS)中空纤维膜在百蕊草提取液初分离过程中的应用.在超滤过程中,从温度、操作压力、预处理方法及膜清洗方法等因素对膜通量的影响进行了考察,并与传统的醇沉方法相比较,以提取物得率和总黄酮含量两个指标进行评价.结果表明,超滤可以有效地除去蛋白等大分子物质和富集有效物质,使用中空纤维膜超滤技术在百蕊草的分离中是可行的.

关键词: 超滤 , 膜通量 , 百蕊草

有机-无机杂化介孔材料包埋南极假丝酵母脂肪酶的研究

顾昊 , 王慧亨 , 玉林 , 戴荣继

材料导报

以四甲氧基硅烷(TMOS)和一定比例的甲基三甲氧基硅烷(MTMS)、二甲基二甲氧基硅烷(DMDMS)、三甲基甲氧基硅烷(TMMS)为硅源,采用酸催化的溶胶-凝胶法包埋南极假丝酵母脂肪酶.比较了有机-无机杂化介孔材料和纯硅基介孔材料固定化南极假丝酵母脂肪酶的酶活力和保留活力,同时还比较了有机-无机杂化介孔材料固定化南极假丝酵母脂肪酶和游离南极假丝酵母脂肪酶的pH、温度以及储存稳定性.结果表明,有机-无机杂化介孔材料固定化南极假丝酵母脂肪酶具有比纯硅基介孔材料固定化南极假丝酵母脂肪酶更高的酶活力和保留活力.其中三取代的有机-无机杂化介孔材料固定化南极假丝酵母脂肪酶的酶活力最高,其保留活力可达到84.9%.此外与游离的南极假丝酵母脂肪酶相比,有机-无机杂化介孔材料固定化南极假丝酵母脂肪酶具有更好的pH、温度和储存稳定性,以及更宽的pH值和温度的酶活力范围.

关键词: 脂肪酶 , 有机-无机杂化 , 包埋

用羧甲基聚合环糊精作手性剂的毛细电泳法分离3种碱性药物

范瑞芳 , 史雪岩 , 顾峻岭 , 玉林 , 傅若农

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2000.04.021

采用5种环糊精衍生物对碱性药物--硫喷妥钠、盐酸氟桂利嗪、山梗菜碱进行了毛细管区带电泳的手性拆分.结果表明,采用含2%(质量分数,其余相同)聚合β-环糊精(P-β-CD)或0.5%羧甲基聚合β-环糊精(CM-P-β-CD)30 mmol/L的Tris-H3PO4缓冲液可使这3种药物达到基线分离;使用CM-P-β-CD时,分离度高达4~35.

关键词: 毛细管区带电泳 , 环糊精 , 硫喷妥钠 , 盐酸氟桂利嗪 , 山梗菜碱

高效液相色谱法拆分盐酸哌醋甲酯的主要代谢产物盐酸哌醋甲酸

张建华 , 玉林

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2003.06.013

首次发展了一种新型快速的采用高效液相色谱直接拆分血液中手性药物盐酸哌醋甲酯(methylphenidate,MPH)的主要代谢产物盐酸哌醋甲酸(ritalinic acid, RA)的方法.实验中采用α1-酸性糖蛋白手性分离柱,以0.4%(体积分数)的醋酸水溶液(含体积分数0.1%的DMOA,pH 3.4)为流动相,成功地对体外试验中RA的含量进行了分析,结果表明在人和狗的血浆中d-MPH的代谢速度明显的快于l-MPH.

关键词: 高效液相色谱法 , 盐酸哌醋甲酯 , 盐酸哌醋甲酸 , 手性分离

自由流电泳及其应用研究进展

屈锋 , 韩彬 , 玉林 , 张丽华 , 张玉奎

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.03.002

对自由流电泳的分离原理、分离模式、影响分离的因素和条件以及自由流电泳仪器的发展进行了介绍,对近年来自由流电泳在离子、小分子和微粒分离,多肽和蛋白质分离,细胞和细胞器分离,药物对映体分离,微芯片装置以及蛋白质组学等方面应用研究的进展进行了综述.引用文献73篇.

关键词: 自由流电泳 , 应用 , 进展

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