王建山
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夏红军
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万广平
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刘家玮
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白泉
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08019
以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水(WCX/HIC)双功能混合模式色谱固定相.该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质,可作为WCX固定相使用.分别考察了该介质在WCX和HIC两种模式下对标准蛋白质的分离性能,并与商品柱进行比较.结果表明,所合成的WCX/HIC双功能固定相在WCX和HIC两种模式下对蛋白质均有较高的分离度和选择性,且分离能力与商品柱相当,两种模式下标准蛋白质的质量和活性回收率均大于93％,表明该柱具有“一柱二用”的功能,适于生物大分子的分离纯化.基于此双功能色谱柱构建的在线单柱二维液相色谱(2DLC-1C)可在60 min内实现8种蛋白质的快速分离.在70 min内完成了对蛋清中溶菌酶的二维纯化,纯度可达到98.3％.该技术中一根色谱柱可当作两根色谱柱使用,对蛋白质组学研究和重组蛋白药物的生产具有重要的应用价值.
关键词:
固定相
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混合模式色谱
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离子交换色谱
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疏水色谱
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二维液相色谱
