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呼吸缺陷型面包酵母催化β-羰基酯的不对称还原

倪宏亮 , 姚善泾

催化学报

以 4-氯-3-羰基丁酸乙酯为模型底物,葡萄糖为碳源,对呼吸缺陷型酵母催化不对称还原合成(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的反应进行了研究. 通过在254 nm下紫外诱变,经2,3,5-氯化三苯四氮唑平板和非发酵型碳源培养基鉴定,得到6株面包酵母的呼吸缺陷型变异株. 并对呼吸缺陷型酵母催化特性和线粒体复合体Ⅰ, Ⅰ+Ⅲ, Ⅱ+Ⅲ和Ⅳ的活性分别进行了测定. 结果表明,呼吸缺陷型酵母催化底物转化率在49%~75%,产物收率在31%~69%,对映体过量值最高可达72%, 比正常酵母提高了18%. 突变株线粒体内复合体Ⅰ~Ⅳ的活性与正常酵母相比都有不同程度的下降.

关键词: 呼吸缺陷型面包酵母 , 4-氯-3-羰基丁酸乙酯 , 不对称还原 , 线粒体复合体 , 紫外诱变

有机介质中固定化面包酵母催化苯甲醛加氢反应

钟春龙 , 梅乐和 , 胡方敏 , 姚善泾

功能材料

研究了活化时间、摇床转速、缓冲液的pH值、反应温度等因素对海藻酸钙固定化面包酵母在有机介质中催化苯甲醛加氢生成苯甲醇的反应活性的影响,并对固定化酵母的重复利用性进行了探讨.结果表明,在pH为10的缓冲液中制备的固定化面包酵母的催化加氢能力最强;活化时间对催化加氢能力有较大的影响;在不同的有机溶剂中,最适的反应温度也不同.

关键词: 面包酵母 , 有机溶剂 , 固定化 , 催化加氢 , 苯甲醛 , 苯甲醇

改进的锐孔法制备粒径均一的聚乳酸微球

余金鹏 , 关怡新 , 姚善泾 , 朱自强

高分子材料科学与工程

锐孔法是制备微胶囊的常用方法之一。文中根据微通道法乳化技术原理,改进了锐孔法实验装置并用于聚乳酸微球的制备;应用简化的聚乳酸微球制备模型,研究了油相注入速率、搅拌器转速、聚乳酸浓度和锐孔内径大小等因素对聚乳酸微球平均粒径d和粒径分布系数(C V)的影响。结果表明,油相注入速率小于1.2 mL/min时,对d和C V影响较小;提高搅拌器转速能降低d;随着聚乳酸浓度的增大,d和C V均呈增大趋势;当锐孔内径处于200μm~550μm时,d和C V与锐孔内径无明显关系。用内径50μm玻璃毛细管针头代替金属针头,成功地制备出粒径均一的聚乳酸微球(d=77.93μm,C V=17.59%)。

关键词: 锐孔法 , 聚乳酸 , 微球 , 单分散

有效控制活性酵母细胞催化β-羰基酯不对称还原反应立体选择性的研究

杨忠华 , 姚善泾

催化学报

以4-氯乙酰乙酸乙酯为β-羰基酯的模型底物,对面包酵母催化其不对称还原反应立体选择性的控制进行了研究.实验发现,利用诸如烯丙基醇和烯丙基溴等酶抑制剂对面包酵母进行预处理,可以控制反应的立体选择性.用烯丙基醇预处理面包酵母时可以提高S型产物的立体选择性; 用烯丙基溴预处理时,可以使反应的立体选择性从通常的S型产物转变为R型产物.立体选择性随着预处理时抑制剂浓度的增大和处理时间的延长而提高.合适的预处理条件可使S型和R型产物的ee值分别达到95%和98%.

关键词: 不对称还原 , 手性醇 , 酵母 , 活性细胞生物催化 , 4-氯乙酰乙酸乙酯 , 4-氯-3-羟基丁酸乙酯

固态发酵-水煮耦合炮制牛蒡子提高牛蒡子苷元含量

欧志敏 , 郭妨元 , 杨根生 , 姚善泾

催化学报

研究了黑曲霉Aspergillus niger ZJUT712菌株固态发酵和水煮工艺相耦合炮制牛蒡子. 结果表明,该工艺提高了牛蒡子中有效成分牛蒡子苷元的含量,从而有利于促进牛蒡子摄入体内迅速起效. 最佳固态发酵炮制条件为: 0.5 g牛蒡子粉、 3 g麸皮、 2 g甘蔗渣、 0.3 g蛋白胨和10 ml Mandels营养液,固液比1∶3.6 g/ml, 初始pH 5.6, 30 ℃发酵 7 d. 牛蒡子苷元产率随底物初始浓度的增加而降低. A.niger ZJUT712转化0.174 mmol/L牛蒡子苷的产率可达93.0%. 7 d时间内A.niger ZJUT712水解牛蒡子苷的过程符合Monod方程,反应动力学常数为Vm=0.083 7 mmol/(L·d), Km=0.16 mmol/L.

关键词: 牛蒡子苷 , 牛蒡子苷元 , β-葡萄糖苷酶 , 中药 , 发酵 , 黑曲霉Aspergillus niger ZJUT712

水相中酵母细胞催化4-氯乙酰乙酸乙酯不对称还原反应

杨忠华 , 姚善泾

催化学报

利用活性酵母细胞催化4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)的不对称还原可以直接合成具有光学活性的4-氯-3-羟基丁酸乙酯(CHBE).实验发现,在水相体系中主要生成D-(S)-型产物,COBE的转化率及CHBE的收率和光学选择性都比较高.考察了底物和产物的浓度、辅助底物的种类和浓度、系的pH和温度以及菌体培养条件等因素对反应的影响.结果表明,在较低COBE浓度下R型产物占优,在高浓度下主要是S型产物;较高的反应温度有利于S型产物的生成,pH≈8.0时可获得较高的S型产物选择性;产物CHBE对COBE的还原反应具有一定的抑制作用.在酵母催化COBE还原的同时需要一定的辅助底物来再生辅酶NAD(P)H,利用乙醇、异丙醇和仲丁醇作辅助底物可获得较高的立体选择性.对数生长期和厌氧条件培养的细胞对生成S型产物较有利.

关键词: 酵母 , 4-氯乙酰乙酸乙酯 , 水相 , 不对称还原 , 手性化合物 , 4-氯-3-羟基丁酸乙酯

离子液体中脂肪酶催化拆分外消旋烯丙酮醇反应

王永泽 , 梅乐和 , 钟春龙 , 姚善泾 , 朱自强

催化学报

以离子液体为溶剂,考察了溶剂类型、水活度、温度、pH值和共溶剂等因素对脂肪酶催化拆分外消旋烯丙酮醇(R,S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-丙烯基)-2-环戊烯-1-酮反应的影响,并与常用于外消旋烯丙酮醇拆分的有机溶剂乙酸乙烯酯进行了比较.结果表明,在离子液体[bmim]PF6中脂肪酶的催化性能较好,酶初始反应速率为18.48μmol/(g·min),半衰期为74.53 h,高于在乙酸乙烯酯中的相应值(9.18μmol/(g·min)和64.29 h).但离子液体中拆分反应的转化率低于在乙酸乙烯酯中的转化率,可以通过向离子液体中补加酰基供体来提高外消旋烯丙酮醇的转化率.两种反应介质中最佳酶反应条件均为水活度0.17,温度40℃和pH=7,但加入共溶剂后,离子液体中脂肪酶催化拆分外消旋烯丙酮醇的效率降低,而在乙酸乙烯酯中则有所提高.

关键词: 离子液体 , (R,S)-4-羟基-3-甲基-2-(2-丙烯基)-2-环戊烯-1-酮 , 脂肪酶 , 拆分

液芯CMC-ALG微胶囊的制备、扩散性能及初步应用研究

柴燚 , 梅乐和 , 姚善泾

膜科学与技术 doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2004.03.003

制备了液芯羧甲基纤维素钠-海藻酸钙(CMC-ALG)微胶囊,考察了葡萄糖、谷氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、乳糖及乳酸等七种底物从溶液向微胶囊内的扩散性质并计算了扩散系数.比较了微胶囊固定化的枯草杆菌与游离培养的生长情况.结果表明,底物在微胶囊中的混合扩散系数约为在纯水中的92%,在微胶囊囊膜中的扩散系数约为在纯水中的70%.固定化枯草杆菌与游离的相比较,没有明显的生长受阻现象,表现出了良好的生物相容性和固定化培养潜力.

关键词: 液芯CMC-ALG微胶囊 , 扩散系数 , 枯草杆菌 , 固定化

高压CO2条件下粗状假丝酵母催化苯乙酮不对称还原合成α-苯乙醇

应小姣 , 姚善泾 , 关怡新

催化学报

研究了在高压CO2条件下利用粗状假丝酵母Candida valida CICC1444活性细胞催化苯乙酮不对称还原合成(R)-α-苯乙醇.高压CO2条件可对粗状假丝酵母细胞的活性产生一定的影响,但反应的选择性反而有所提高,证实了高压CO2作为该反应环境是可行的.考察了底物浓度、细胞用量、反应温度和压力等因素对反应的影响.结果表明,这些因素对反应产率有很大的影响,在最佳反应条件下,反应底物苯乙酮的转化率和产物α-苯乙醇的产率均可达90%以上,对映体过量值(ee)保持在80%左右.与常压静置条件下的反应相比,高压CO2条件下粗状假丝酵母催化苯乙酮不对称还原反应的转化率和产率分别提高了20%和40%左右,对映体选择性也提高了5%~10%.

关键词: 高压二氧化碳 , 粗状假丝酵母 , 全细胞 , 生物催化 , 苯乙酮 , 不对称还原 , α-苯乙醇

活性酵母细胞不对称催化苯乙酮还原及树脂吸附对反应的促进作用

杨忠华 , 姚善泾 , 赵珺

催化学报

以苯乙酮为模型底物,研究了水相体系中酵母细胞催化前手性芳香酮不对称还原生成相应手性醇的反应特性. 实验发现,酵母细胞催化苯乙酮不对称还原的产物以(S)-α-苯乙醇为主,反应的立体选择性很高,(S)-α-苯乙醇的对映体过量值可达99%左右. 在pH为7~8, 酵母细胞用量为0.2 g/ml的条件下能获得较高的产物收率(可达35%左右). 酵母细胞能选择性地氧化(S)-α-苯乙醇,而留下(R)-α-苯乙醇. 在反应体系中加入合适的吸附树脂,可以降低底物和产物对细胞的毒害作用,显著提高反应底物的初始浓度,从而提高产物收率.

关键词: 生物催化 , 酵母细胞 , 苯乙酮 , 不对称还原 , 手性醇 , 苯乙醇 , 树脂 , 吸附

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