张荣
,
刘昌辉
,
王宁生
,
宓穗卿
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.01.016
建立了一种快速、高效的以睾酮作为探针药物评价细胞色素P450 3A4(CYP3A4)酶活性的高效液相色谱-紫外检测方法.采用的色谱柱为Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),梯度洗脱,流速1.0 mL/min,紫外检测波长245 nm,柱温30 ℃.睾酮与大鼠肝微粒体温孵后,过已活化好的C18固相萃取小柱,收集甲醇洗脱液,于37 ℃水浴中通N2吹干,用50%甲醇复溶后进样分析测定.研究结果表明,6β-羟基睾酮的保留时间为11.60 min,线性范围为0.5～32 μg/mL,最低检出质量浓度为0.02 μg/mL,提取率为88.41%～92.73%,方法的回收率为99.07%～101.30%;睾酮的保留时间为19.27 min,线性范围为0.5～40 μg/mL,最低检出质量浓度为0.01 μg/mL,提取率为89.59%～92.66%,方法的回收率为96.50%～98.03%.两者的日内、日间相对标准偏差均小于10%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定.该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外睾酮及其代谢物6β-羟基睾酮的测定,可应用于体外CYP3A4酶活性的评价及酶动力学的研究.
关键词:
高效液相色谱法
,
睾酮
,
6β-羟基睾酮
,
细胞色素P450 3A4
,
肝微粒体
伍海涛
,
陈传兵
,
王宁生
,
宓穗卿
,
廖南英
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.06039
为了解促渗透剂对不同物质的促渗透能力,建立了采用高效液相色谱分离测定8个普萘洛尔衍生物的分析方法.采用盒式给药技术在离体角膜上皮侧给予普萘洛尔衍生物,内皮侧接收灌流液,用甲醇沉淀蛋白、高速离心后进样,采用Agilent Zorbax Extend色谱柱,以乙腈(A)-0.03％ (v/v)磷酸水溶液(B)为流动相,在3％A～20％A间梯度洗脱,柱温30℃,检测波长205 nm.结果表明,该方法可在31 min内实现离体角膜灌流液中8个衍生物的完全分离和定量,线性范围为0.2 (0.1)～ 40.0 μmol/L,线性关系良好,相关系数均不小于0.9970.其加样回收率为91.12％～105.73％,日内精密度(相对标准偏差(RSD))为1.00％～11.63％,日间精密度为1.18％～18.58％,样本冻存、冻融稳定性良好.该法适用于离体角膜灌流、细胞小室培养等跨膜吸收研究中普萘洛尔衍生物的检测.
关键词:
高效液相色谱
,
普萘洛尔
,
衍生物
,
角膜
