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5,5′-二硫硝基苯甲酸柱前衍生高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸

刘忠 , 杨文博 , 金永杰 , 白钢

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.03.010

以5,5′-二硫硝基苯甲酸(DTNB)为柱前衍生试剂对酶促反应液进行衍生化,用C18色谱柱在室温下采用二元梯度洗脱,于330 nm波长下检测,同时以2-巯基乙醇和二硫苏糖醇(DTT)为对照,对L-半胱氨酸的分离峰进行确认,并对酶促反应液中的L-半胱氨酸进行分离测定.L-半胱氨酸浓度为5～950 μmol/L时,其浓度与峰面积呈显著的线性关系.高、中、低浓度水平的L-半胱氨酸加标回收率为99.7% ～100.5% ,相对标准偏差小于1.3% ,检测限为0.8 μmol/L.方法简便、快速、可靠.用于样品分析,结果令人满意.摘要:以5,5′-二硫硝基苯甲酸(DTNB)为柱前衍生试剂对酶促反应液进行衍生化,用C18色谱柱在室温下采用二元梯度洗脱,于330 nm波长下检测,同时以2-巯基乙醇和二硫苏糖醇(DTT)为对照,对L-半胱氨酸的分离峰进行确认,并对酶促反应液中的L-半胱氨酸进行分离测定.L-半胱氨酸浓度为5～950 μmol/L时,其浓度与峰面积呈显著的线性关系.高、中、低浓度水平的L-半胱氨酸加标回收率为99.7% ～100.5% ,相对标准偏差小于1.3% ,检测限为0.8 μmol/L.方法简便、快速、可靠.用于样品分析,结果令人满意.

关键词: 高效液相色谱法 , 5,5′-二硫硝基苯甲酸 , 柱前衍生 , L-半胱氨酸 , 酶促反应液