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核磁共振法研究大肠杆菌细胞内La3+与钙调蛋白的相互作用

杨秦 , 刘会雪 , 李勤 , 杨晓达 , 王夔

中国稀土学报

应用in-cell和cell free 核磁共振(NMR)方法分别研究了柠檬酸镧与大肠杆菌细胞内15N标记的钙调蛋白(CaM) 以及La3+和大肠杆菌无细胞提取液(Cell free extract, CFE)的相互作用.将所得1H-15N HSQC NMR谱与纯化过的以不同组成比结合Ca/La的CaM的1H-15N HSQC NMR谱比较, 发现在细胞内因胞内环境拥挤, 蛋白运动能力下降, 使CaM 的NMR信号较少且峰宽增加.而柠檬酸镧可以透过细胞膜进入细胞, 并与胞内的CaM结合.无细胞提取液的NMR谱显示, 加镧之前细胞内CaM主要以Ca结合态存在, 而加入La3+可能形成Ca2La2CaM混合金属配合物.这和无细胞的化学体系的实验结果一致.实验结果显示, 细胞水平NMR方法可用于研究稀土以至其他金属配合物与细胞的相互作用如何与细胞内钙调蛋白作用, 以及有关的生物功能.

关键词: 钙调蛋白 , La3+ , in-cell NMR , 稀土

镧对肝细胞株7701的增殖和对蛋白质表达的影响

刘会雪 , 杨晓达 , 王夔

中国稀土学报

采用MTT法考察了La3+在2×10-4~4×10-7 mol·L-1浓度范围内对体外培养的人正常肝细胞株7701的生长和增殖的影响及其对浓度的依赖关系.结果表明,低浓度的La3+对细胞有明显的促增殖作用,而高浓度的La3+对细胞的生长表现抑制作用.为探讨促增殖的细胞是否正常,利用双向凝胶电泳技术,对La3+诱导增殖的细胞和对照组正常细胞进行蛋白质分离和分析,发现两组细胞蛋白质的表达存在着明显的差异,表示在稀土促进增殖下的细胞可能并非正常,并讨论了La3+促进细胞增殖的可能机制及其过程.

关键词: 稀土生物效应 , 增殖 , 蛋白质组 , 双向凝胶电泳 , 稀土

稀土对人正常肝细胞株7701和人宫颈癌Hela细胞生长的影响及其诱导细胞凋亡的作用

刘会雪 , 杨晓达 , 王夔

中国稀土学报

采用MTT法考察了16种稀土元素在9×10-8~2×10-4 mol·L-1浓度范围内对体外培养的人正常肝细胞株7701细胞和宫颈癌Hela细胞的生长的影响.结果表明,稀土对细胞生长的影响存在浓度依赖性;低浓度促进细胞增殖,高浓度抑制细胞生长;不同稀土离子对细胞作用强弱不同,稀土间存在轻重分组效应;不同细胞对稀土的响应不同,表现出稀土对正常细胞和癌细胞作用的某种选择性.Hoechst 33258标记细胞DNA,用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪对稀土处理的肝细胞株7701进行形态学观察和DNA含量分析.结果表明,较高浓度的稀土作用后的肝细胞株7701出现了明显的凋亡特征,稀土表现出的细胞毒性作用,其本质是诱导细胞发生凋亡.

关键词: 细胞 , 增殖 , 凋亡 , 稀土

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