王贤纯
,
梁宋平
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2001.02.002
利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）和离子交换色谱（IEC）比较研究了固相化学合成的多肽类神经毒素虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ（HWTX-Ⅰ）与其对应的天然产物的色谱行为差异及分离纯化方法。发现在完全相同的实验条件下，复性处理后的合成HWTX-Ⅰ的谱峰有别于还原变性后又复性的天然HWTX-Ⅰ的谱峰，主要表现为扩散度较大，对称性较差，说明合成产物存在更大分子构象的不均一性。推测除了在合成HWTX-Ⅰ复性过程中有少数分子发生二硫键错配外，还有部分分子在固相合成中发生了消旋作用，需要交替采取多种色谱法才能完全分离纯化复性后的合成多肽产物。
关键词:
色谱
,
纯化
,
多肽
,
固相合成
全妙华
,
曾雄智
,
皮建辉
,
邓梅春
,
梁宋平
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.04.011
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液、pH 7.50、1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05 mg/L、复性温度为4 ℃.膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5)nmol/L和(39.6±3.2)nmol/L.与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基.
关键词:
化学合成
,
敬钊毒素-V剪切体
,
复性
,
钠离子通道
张鹏飞
,
肖顺勇
,
梁宋平
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.04.025
将纯化的天然虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅴ经盐酸胍变性30 min后,在pH 3.0、反应温度为37 ℃的条件下与三羧甲基磷酸(TCEP)反应12 min,用反相高效液相色谱分离得到其全部去折叠中间体,通过基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行鉴定,并利用烷基化反应对这些去折叠中间体予以进一步确证. 根据其保留时间,分析虎纹毒素-Ⅴ各去折叠中间体的色谱行为,初步探讨了多肽或蛋白质构象异构体反相色谱行为的多样性.
关键词:
反相高效液相色谱
,
基体辅助激光解吸电离-飞行时间质谱
,
三羧甲基磷酸
,
去折叠
,
虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅴ
曾雄智
,
皮建辉
,
梁宋平
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.06.007
敬钊毒素-Ⅰ(JZTX-Ⅰ)是一种能够抑制心肌钠通道失活的新型蜘蛛神经毒素,该文结合高效液相色谱与色氨酸荧光测定技术研究了JZTX-Ⅰ的磷脂膜结合活性.脂质体共沉淀实验表明,JZTX-Ⅰ具有不依赖于带负电荷磷脂组成的生物膜结合活性.当加入由酸性或中性磷脂构成的脂质体后,JZTX-Ⅰ能够分别产生6.4和4.7 nm的蓝移以及7.4和8.0 nm的红移激发漂移,显示JZTX-Ⅰ能够插入磷脂膜,同时该分子疏水表面的色氨酸残基处于一个运动受限的界面区域.荧光淬灭实验进一步证实,与脂质体结合能够减少该毒素分子表面色氨酸残基的溶剂暴露.该研究结果为阐明JZTX-Ⅰ的离子通道门控调节机制提供了新的信息.
关键词:
高效液相色谱
,
荧光谱
,
单层小脂质体
,
敬钊毒素-Ⅰ
