韩彬
,
王平利
,
张丽华
,
屈锋
,
梁振
,
邓玉林
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.001
芯片自由流电泳对于来源稀少的重要生物样品的连续预分级和微制备具有重要的意义.本文在自由流芯片的微分离腔内,通过原位光引发聚合反应制备了聚丙烯酰胺整体材料,并进行了pH梯度的固定化,从而构建了基于固定化pH梯度整体(M-IPG)材料的芯片自由流等电聚焦模式(μFF-IEF).利用该新型分离模式,实现了异硫氰酸荧光素(FITC)标记的最小等电点相差0.33的甘氨酸、脯氨酸和赖氨酸混合物的分离,且分离结果优于传统的μFF-IEF.实验结果表明,通过发展基于M-IPG材料的μFF-IEF模式,不仅可以避免在缓冲溶液中添加两性电解质对后续采用其他模式分离和质谱鉴定的干扰,而且可以获得较高的分离和富集能力,有望在微量样品的连续分离和制备方面发挥重要作用.
关键词:
芯片自由流电泳
,
等电聚焦
,
固定化pH梯度
,
整体材料
,
氨基酸
梁玉
,
吴慈
,
戴忠鹏
,
梁作成
,
梁振
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00469
微流控芯片高效液相色谱-串联质谱系统具有高通量、高灵敏度等优点,已成为生物样品分析的热点领域之一.本文在玻璃芯片上以甲基丙烯酸十二酯(LMA)和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TMPTMA)为单体,制备了以聚丙烯酸酯整体材料为固定相的捕集柱和分离柱.通过在芯片通道末端连接细内径的毛细管作为芯片-质谱接口,并以常规的液相色谱泵和微阀控制流体,构建了芯片反相液相色谱-电喷雾串联质谱(RPLC-ESI-MS/MS)平台,并将其用于分析牛血清白蛋白(BSA)的酶解产物.经过3次平行分析,BSA的序列覆盖率分别为39.37％、37.89％和34.10％(相对标准偏差为7.3％).采用不同批次制作的芯片构建RPLC-ESI-MS/MS平台,对BSA酶解产物进行分析,其序列覆盖率相当.上述结果表明,该平台具有灵敏度高和重现性好等优点,有望用于蛋白质样品的快速分离和高灵敏度鉴定.
关键词:
微流控芯片
,
反相液相色谱
,
串联质谱
,
整体材料
,
蛋白质分析
李沁然
,
杨开广
,
李森武
,
刘键熙
,
张丽华
,
梁振
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.06029
应用可逆加成-断裂链转移（ RAFT）策略制备了一种抗原决定基表面印迹微球。这一工作以转铁蛋白的抗原决定基 N端九肽作为模板，通过共价键合的方式固载于修饰了戊二醛的硅胶颗粒表面。然后以甲基丙烯酸、甲基丙烯酰羟乙酯为功能单体，甲叉基双丙烯酰胺为交联剂，偶氮二异丁腈（ AIBN）为引发剂，N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，在三硫酯试剂2-（十二烷基三硫代碳酸酯基）-2-甲基丙酸的调控下，于70℃进行活性-可控的聚合反应，制备得到分子印迹微球。该材料对模板抗原决定基的识别容量为2.36 mg/g，印迹因子为1.89；对转铁蛋白的识别容量为4.98 mg/g，印迹因子为1.61，120 min内可达到吸附平衡；在多蛋白质竞争识别中，该材料对转铁蛋白识别的印迹因子远高于细胞色素C、乳球蛋白等其他竞争蛋白质的印迹因子。以上结果证明，通过RAFT策略制备得到的抗原决定基分子印迹材料在对抗原决定基具有良好的识别能力的同时，对模板抗原决定基对应的转铁蛋白也具有优良的选择性、较高的识别容量和较快的识别速度。
关键词:
可逆加成-断裂链转移(RAFT)
,
抗原决定基
,
分子印迹
,
蛋白质
邓楠
,
梁振
,
边阳阳
,
张明建
,
张柯
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10012
基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法.采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质.比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESI-MS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析.结果表明,MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29.5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性(26.7%).血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21.31%(洗脱体系1)和26.20%(洗脱体系2).在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中的质量浓度约为0.29 ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到.结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路.
关键词:
随机寡核苷酸文库
,
血浆
,
蛋白质
,
高丰度
,
低丰度
,
谱图数量
梁振
,
段继诚
,
张维冰
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2003.01.003
毛细管电泳-电喷雾质谱联用以其高效及高准确性被广泛应用于很多领域.联用过程中,质谱信号强度受多种因素的影响,缓冲溶液pH是其中之一.以两种小肽(组氨酸-脯氨酸-亮氨酸(His-Pro-Leu)和丙氨酸-色氨酸(Ala-Trp))为例从理论上探讨了分离的缓冲溶液和包层液形成的混合液中H+浓度对质谱信号的影响.结果表明,缓冲液和包层液对质谱信号的影响不是独立的,而是两者的相互耦合.
关键词:
毛细管电泳
,
电喷雾接口
,
质谱
,
pH值
,
检测灵敏度
朱贵杰
,
张丽华
,
梁振
,
张维冰
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.02.002
整体材料具有通透性好、传质速度快、性能稳定而且容易制作等优点.它不仅可以作为微柱液相色谱和毛细管电色谱的固定相,而且也可用作样品富集和酶反应器的载体.目前,整体材料已受到越来越多的关注,并被广泛应用于各个领域.本文对近两年有机基质和无机基质整体材料的研究进展及其在微柱分析领域中的应用进行了系统的综述.
关键词:
整体材料
,
微柱分离
,
样品富集
,
酶反应器
,
综述
赵鹏
,
陶定银
,
梁振
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.03.001
通过将展示单链抗体(scFv)文库的M13噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器.由于展示的scFv片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点,因此其非常适合用于复杂蛋白质样品的预处理.将肾病患者尿蛋白在平衡器上反复上样5次后,依次使用2 mol/L NaCl、50 mmol/L Gly-HCl(pH 2.5)和凝血酶溶液洗脱与均衡器结合的蛋白质,收集各馏分,并采用串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱进行蛋白质的分离鉴定.与未经均衡器处理的样品相比,鉴定的蛋白质数目由142个提高到396个.此外,凝胶电泳的分析结果显示,在上样流出液中蛋白质的浓度差异明显变小,大量的高丰度蛋白质存在于NaCl洗脱液中.上述结果表明,基于M13噬菌体展示scFv文库的新型蛋白质均衡器能够有效减小样品中蛋白质的浓度差异,有利于发现更多的低丰度蛋白质.
关键词:
蛋白质均衡器
,
M13噬菌体展示单链抗体文库
,
串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱
,
蛋白质
,
肾病患者
,
尿
高亮
,
乔晓强
,
梁振
,
张丽华
,
霍玉书
,
张玉奎
色谱
建立了基于在线二维弱阴离子交换色谱-反相液相色谱(2D-WAX-RPLC)的蛋白质分离系统,并用于不同生长时期鹿茸的比较蛋白质组分析.以5种标准蛋白质的混合物为样品,考察了系统的重现性.通过改变标准蛋白质之间的浓度比,研究了该系统进行蛋白质相对定量的能力.在此基础上,针对4个不同生长时期的鹿茸样品,分别采用5种不同的方法进行蛋白质提取,经2D-WAX-RPLC分离后,收集各生长时期对应蛋白质的峰高最大比超过2的组分.酶解后,采用微柱反相液相色谱-串联质谱(μRPLC-MS/MS)进行肽段的分离鉴定;共从9个差异蛋白质峰中鉴定到了22个差异蛋白质.研究结果表明,利用基于蛋白质水平的在线二维液相色谱分离技术找寻差异蛋白质,具有重现性好、自动化程度高等优点,可用于开展比较蛋白质组学的研究.
关键词:
在线二维液相色谱
,
鹿茸
,
蛋白质组
,
不同生长时期
,
比较蛋白质组学
