白海红
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范超
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沈丙权
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田芳
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邓玉林
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潘一廷
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秦伟捷
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钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.11022
蛋白质的 N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关，是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质，且糖链结构具有高度微不均一性，这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合（ SI-ATRP ）法，以带有双键的氨基葡萄糖为单体（GMAG），成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料（pGMAG-SiO2）。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层，该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度，而且显著提高了其亲水性，因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象，考察了该填料对N-糖链的富集效果，并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白 N-糖链的富集检测，共鉴定了47种糖型。以上结果表明，pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性，可以用于 N-糖链的高覆盖率鉴定。
关键词:
表面引发-原子转移自由基聚合反应
,
核壳型硅胶填料
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N-糖链
,
N-糖基化蛋白质
潘一廷
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马成
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白海红
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张养军
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秦伟捷
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钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03055
为了增加开管毛细管柱(OTCC)的相比,提高分离效率,发展了表面引发原子转移自由基聚合法(SI-ATRP)制备葡萄糖聚合物修饰的开管毛细管柱.通过扫描电镜观察,该开管柱内壁上修饰了三维波浪状聚合物,明显增加了内壁比表面积和相比.在pH 3 ～11范围内,对含糖聚合物修饰的开管柱和空柱的电渗流进行了比较.修饰后开管柱的电渗流仅为空柱的1/2 ～ 1/3,且在pH6 ～11范围内保持平稳.稳定的电渗流保证了分离的重复性和稳定性.用该开管毛细管柱成功实现了小分子混合物(苯丙氨酸、胸腺嘧啶、腺苷、鸟苷、5-溴尿嘧啶、水杨酸)以及蛋白质大分子(核糖核酸酶B、转铁蛋白和牛血清白蛋白)的有效分离,结果表明葡萄糖聚合物修饰的开管毛细管柱具有良好的重复性和稳定性.
关键词:
表面原子转移自由基聚合
,
毛细管电色谱
,
开管毛细管柱
,
糖聚合物
马成
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潘一廷
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张琪
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王继峰
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钱小红
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应万涛
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.05043
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白.针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物.然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率.本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型.在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8％).本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段.
关键词:
超滤辅助样品制备
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亲水相互作用色谱
,
反相色谱
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N-糖基化蛋白
,
N-糖
