张鲲
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任晓君
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牟颖
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薛雁
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郭灿辉
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阎岗林
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罗贵民
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沈家骢
催化学报
以β-环糊精(CD)为酶模型,将Te引入β-环糊精中,成功地合成出一种新的水溶性好、活力高的谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)小分子模拟物2-TeCD,并对其结构进行了表征. 采用Wilson辅酶偶联法,间接测定了2-TeCD催化还原型谷胱甘肽(GSH)还原H2O2的GPX活力为46.7 U/μmol,与文献报道的数据相比,2-TeCD的GPX活力最高. 通过考察2-TeCD催化GSH还原H2O2反应的动力学,发现反应初速度对底物浓度的双倒数曲线为一组平行线,表明2-TeCD所遵循的催化机制可能为三转移乒乓机制. 通过考察自由基捕获剂2,4-二叔丁基甲基苯酚对酶促和自发反应速率的影响,发现2-TeCD催化的酶促反应为非自由基机理. 通过考察酶不可逆抑制剂碘乙酸对酶促反应速率的影响,发现2-TeCD催化反应过程中不生成碲醇中间体. 由此推测出2-TeCD的催化循环经历碲硫化合物、次碲酸硫酯和次碲酸中间体. 该催化循环与含硒GPX小分子模拟物所经历的催化循环不同,以及环糊精对底物具有识别与结合的能力,可能是2-TeCD具有高GPX活力的主要原因.
关键词:
β-环糊精
,
谷胱甘肽过氧化物酶
,
碲
,
人工酶
吴文帅
,
丁雄
,
牟颖
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10005
精准医疗急需更加精确、灵敏、方便快捷的核酸定量方法.设计开发了一种结合双荧光等温扩增的高密度皮升级核酸定量微流控芯片.芯片采用多层软光刻技术制成,有3个反应通道,每通道有 40 000 个反应小室,共 120 576 个皮升级反应小室,反应小室的密度达 7 000/cm2.芯片利用负压驱动样品精确分配,热凝固油相封闭小室,无需阀门及其他仪器辅助.芯片中嵌入的氟硅烷纳米涂层能有效地阻止反应过程中水蒸气的散失.以乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)质粒作为模板,进行等温多底物自配引发扩增(isothermal multiple self-matching-initiated amplification, IMSA),测试芯片定量性能.芯片检测模板的动态范围达6个数量级,可检测的最大模板量为36 μL中1.13×106拷贝数核酸.该装置具有定量精确、灵敏、快捷、操作简单等优势,可用于精准检测.
关键词:
微流控芯片
,
负压驱动
,
等温多底物自配引发扩增
,
高密度
,
精确定量
