时祥柱
,
郭春腾
,
周建武
,
王中来
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2002.04.005
以普通定性滤纸为底物,经碱处理后,研究其对纤维素酶的亲和吸附作用.结果表明,普通定性滤纸对纤维素酶具有比较强的特异性吸附作用,能够从粗酶液中分离出纤维素酶,再经POROS 20HQ阴离子交换柱纯化后即可得到电泳纯的纤维素酶.该法大大简化了传统的纤维素酶纯化工艺,所得的纤维素酶活力极高,比活达350 U/mg以上,滤纸一步吸附后纤维素酶的纯化倍数为9.55,活性回收率在10%左右.纯化后的纤维素酶为内切β-葡聚糖酶,相对分子质量为60000,最佳pH为4.0,最佳温度为70 ℃.
关键词:
纤维素酶
,
滤纸
,
纯化
,
亲和
王宾香
,
时祥柱
,
郭春腾
,
叶秀云
,
王中来
,
饶平凡
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.05.018
将阴阳离子交换色谱柱在灌注色谱工作站上串联,使苦瓜籽粗提液中未被阴离子色谱柱吸附的蛋白质直接在阳离子色谱柱上吸附,用盐线性梯度洗脱从阳离子色谱柱上分离出两个具有抗真菌活性的蛋白.两个抗真菌蛋白经鉴定都达到了电泳纯,相对分子质量均为30 000左右,N-端氨基酸序列分别为DVSFRLSGADPRSYGMFI与DVNFDLSTATAK,表明所得到的两种蛋白为苦瓜籽中的2个Ⅰ型核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC) 和β-苦瓜素(β-MMC).抗菌实验表明,α-MMC对香蕉枯萎菌和果腐霉菌均具有较强的抑制作用,β-MMC对果腐霉菌有较强的抑制作用,而α-MMC和β-MMC对白绢菌的抑制活性均不明显.采用串联色谱,α-MMC和β-MMC的质量回收率分别为13.8%和8.0%.
关键词:
阴离子交换色谱
,
阳离子交换色谱
,
串联色谱
,
苦瓜籽
,
纯化
,
核糖体失活蛋白
