王秀中
,
王清清
,
王诗鸿
,
李卫平
,
宋海峰
,
鲁丹丹
,
王升启
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00561
采用两步固相萃取(SPE)法结合无胶筛分毛细管电泳(NGCE)技术建立了猕猴血浆中的反义寡核苷酸药物癌泰得的定量分析方法.优化并确定了SPE的相关条件(阴离子交换柱,上样缓冲液pH值为9.0,上样体积及洗脱体积分别为5 mL和3 mL)和NGCE的分析条件(灌胶时间为30 min,分离电压为24 kV).在优化的条件下,猕猴血浆中癌泰得在1.95～250 mg/L 范围内呈良好的线性关系,定量限(LOQ)为1.95 mg/L.批内准确度为93.38% ～100.71% ,批内相对标准偏差＜11% ;批间准确度为89.46% ～103.46% ,批间相对标准偏差＜9% .在不同条件(室温下存放4 h; 4 ℃下存放24 h;反复冻融(-80 ℃至室温)2次;-80 ℃下保存1个月)下癌泰得在猕猴血浆中的稳定性良好.已将该方法成功地应用于癌泰得的猕猴药代动力学研究.
关键词:
固相萃取
,
无胶筛分毛细管电泳
,
反义寡核苷酸
,
癌泰得
,
猕猴
杨秉呼
,
孙偶君
,
张敏丽
,
王升启
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.03.003
癌泰得为20碱基的抑制端粒酶催化亚基hTERT的硫代反义寡核苷酸,体内、体外抗肿瘤活性评价显示其有较好的抗肿瘤活性.采用固相合成仪分别制备了癌泰得及与其碱基百分组成基本相同的硫代寡核苷酸内标,并使用制备型阴离子交换色谱和反相高效液相色谱进行纯化.采用毛细管凝胶电泳仪和单链DNA分离试剂盒测定了癌泰得的含量.所用毛细管规格为内径100 μm,总长31 cm,有效长度20 cm;电动进样,进样电压-10 kV,进样时间1 s;分离电压-12.4 kV;柱体温度40 ℃;样品储存温度为30 ℃;缓冲溶液为pH 8.5的Tris-硼酸盐-7 mol/L 尿素缓冲液;紫外检测,波长为254 nm.结果表明,在12.5～800 mg/L时呈现良好的线性关系(r=0.99997);最低检测限为0.220 mg/L;日内、日间的相对标准偏差(RSD)分别为0.449% ～1.89% 和1.01% ～1.48% ;低、中、高3种浓度的平均回收率为96.95% ,RSD为6.88% .说明毛细管凝胶电泳内标法用于反义硫代寡核苷酸的含量测定结果准确、可靠.
关键词:
毛细管凝胶电泳
,
癌泰得
,
反义硫代寡核苷酸
,
药物
张嵬
,
杨秉呼
,
梁乾德
,
鲁丹丹
,
林汝仙
,
王升启
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.04.010
为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法.样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为内标,采用毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得的含量.结果表明,毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的线性范围为12.5～400 mg/L(r=0.999 8),日内、日间的相对标准偏差分别为0.398% ～2.46% 、2.75% ～6.07% ,回收率为99.53% ～102.1% .毛细管凝胶电泳法用于血浆中反义硫代寡核苷酸的含量测定具有良好的准确性、稳定性和重现性.
关键词:
毛细管凝胶电泳
,
反义寡核苷酸
,
癌泰得
,
药代动力学
张宏燕
,
鲁丹丹
,
吴利霞
,
周喆
,
王升启
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.05.003
为了进行硫代反义寡核苷酸药物FT19的质量控制研究,建立了用阴离子交换高效液相色谱(AX-HPLC)和毛细管凝胶电泳(CGE)分析自行合成的FT19有关物质的方法.设计合成了FT19的硫代不完全序列(P=O)1和短序列(n-x)并将它们作为已知杂质.在AX-HPLC上,使用的分析柱为DNA Pac PA-100(4 mm x250 mm);流动相A为10 mmol/L NaOH-0.1 mol/L NaCl,流动相B为10 mmol/L NaOH-3 mol/L NaCl;梯度洗脱条件为流动相B液在8 min内从60%升至100%;流速1 mL/min;柱温40 ℃;检测波长为260 nm.CGE所用毛细管规格为内径100 μm,总长度为31 cm,有效长度为20 cm;电泳缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷(Tris)-硼酸-7 mol/L尿素,pH8.5;采用电动进样,进样电压-10 kV;分离胶为250 g/L的聚丙烯酰胺;检测波长为254 nm.结果表明,FT19与硫代不完伞的(P=O)1序列在AX-HPLC上能够达到基线分离,与短序列(n-1)在CGE上能达到基线分离.说明AX-HPLC和CGE联合应用能够很好地分析FT19中的有关物质.
关键词:
阴离子交换高效液相色谱
,
毛细管凝胶电泳
,
硫代反义寡核苷酸
,
有关物质
