王希越
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高鹏
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连丽丽
,
娄大伟
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许国旺
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10004
研究开发了一种基于96孔板培养和气相色谱?质谱联用（ GC?MS）技术的高通量细胞表型分析方法。该方法分别以48种物质作为唯一能源对大肠杆菌进行培养，利用GC?MS研究野生型和yfcC基因改造大肠杆菌对各物质的分解代谢情况，实现高通量的细胞表型分析。结果显示，野生型和yfcC基因过表达大肠杆菌对14种物质的代谢能力有显著差异，yfcC基因过表达大肠杆菌对甘氨酸和柠檬酸的代谢能力明显强于野生型大肠杆菌，而对其他物质的代谢能力较弱，我们推测可能是由于yfcC基因促进乙醛酸代谢，导致yfcC过表达菌株对甘氨酸的代谢能力较强；野生型和yfcC基因敲除大肠杆菌间分解有显著差异的共16种物质，其中yfcC基因敲除大肠杆菌对丙氨酸、乳糖、肌醇和柠檬酸的代谢能力较强。该方法简单、高效，可以为未知基因功能研究提供更多代谢功能相关的参考数据。
关键词:
气相色谱-质谱
,
高通量
,
表型
,
基因功能
王希越
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高鹏
,
许国旺
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.08008
建立了两性离子亲水作用色谱/质谱联用方法用于大肠杆菌胞内极性代谢物的分离分析。选取52个代表性极性物质对方法进行考察，发现此方法有较好的线性范围，且大部分物质最低检测限均在 ng/mL 数量级。平行制备6份样品进行分析，结果显示85％以上代谢物峰面积的 RSD值小于30％。6个内标物质在低、中、高3个浓度下的日内精密度（ RSD）均小于20％，大部分物质的相对回收率都在可接受的范围内（70％~130％）。把此方法用于yfcC基因改造的3株大肠杆菌代谢组分析，发现一些小肽、氨基酸、核苷、有机酸、磷脂等物质在基因改造后发生明显变化。此研究结果表明，建立的两性离子亲水作用色谱/质谱方法检测到的物质化学性质分布广，跨越了极性磷脂到小肽的各个范围，且具有良好的重复性、稳定性和适用性。
关键词:
两性亲水作用色谱/质谱
,
极性物质
,
大肠杆菌
,
代谢组分析
