周月芳
,
张焱
,
罗坚
,
康丽梅
,
陈毅
,
石红
,
孟庆雄
,
苏志国
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03026
乳腺生物反应器可以高效表达重组人单克隆抗体,但是目标产品与乳液原料中的牛抗体性质、结构非常类似,分离难度很大.本文对牛抗体和重组人抗体的种属差异进行了分析,并在此基础上制定了新型分离策略,采取Protein A亲和色谱和免疫亲和色谱来解决混合抗体的分离问题,并讨论了色谱洗脱模式对分离效果的影响.结果表明,Protein A亲和色谱结合梯度洗脱可以有效地纯化得到混合抗体,但是难以彻底分离重组人抗体和牛抗体；相比之下,使用Protein A亲和色谱结合置换色谱模式可以更加高效地分离混合抗体,最终可以得到纯度高达95％以上的重组人抗体,回收率可达95％以上.免疫亲和色谱同样可以有效地分离纯化重组单克隆抗体,且其通用性更强,可以应用于任何动物乳腺表达重组人抗体的分离纯化中.
关键词:
Protein A亲和色谱
,
免疫亲和色谱
,
重组人抗体
,
牛抗体
,
乳腺生物反应器
祝振洲
,
苏仪
,
伊守亮
,
周浩力
,
陈向荣
,
苏志国
,
万印华
膜科学与技术
doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2010.03.014
采用自制的硅橡胶-沸石杂化优先透乙醇渗透汽化复合膜,利用响应曲面法研究原料液温度和循环流速两个参数对乙醇质量分数为4.05%的乙醇-水体系渗透汽化分离过程的影响.试验表明,温度对膜的通量和分离因子都有显著的影响,温度升高通量增加,而在50℃以下分离因子随温度升高而增加,此后分离因子随温度升高而下降.循环流速的增加会导致通量和分离因子的下降.综合考虑分离因子和通量这两个响应值,利用回归方程求得本试验所采用的渗透汽化复合膜在乙醇一水体系中最优操作条件是:温度59.8℃,循环流速30 L/h,此时总通量和乙醇分离因子分别达到242.8 g/(m2·h)和20.6.
关键词:
响应曲面
,
渗透汽化
,
工艺优化
康丽梅
,
张焱
,
罗坚
,
李由
,
周月芳
,
余蓉
,
苏志国
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.01036
建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子Ⅷ(FⅧ)的纯化工艺.基于FⅧ和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺.分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳).结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FⅧ产品.FⅧ在超大孔制备色谱过程中的回收率(85％)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg.此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性.本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产.
关键词:
超大孔离子交换制备色谱
,
凝血因子Ⅷ
,
血浆蛋白
,
分离纯化
杭晓风
,
陈向荣
,
马光辉
,
苏志国
,
万印华
膜科学与技术
doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2008.02.013
考察了五种纳滤膜在高盐浓度下对溶液的脱盐性能,选择NF270进一步考察了pH值、氯化钠浓度、膜通量、搅拌速度对纳滤膜分离性能的影响.实验结果表明,虽然高盐浓度对膜表面的电荷屏蔽作用严重,但随着pH值的增加,NF270对谷氨酸的截留率增加,膜的分离选择性也同时增加,而跨膜压力随着pH值的增加而减小.在选择合适的膜通量和搅拌速度时,NF270对谷氨酸的截留率达到95.0%,膜的分离选择性达到18.8,可以实现高盐浓度下谷氨酸溶液的脱盐.
关键词:
纳滤
,
谷氨酸
,
氯化钠
,
脱盐
万印华
,
陈向荣
,
马光辉
,
苏志国
,
崔占峰
膜科学与技术
doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2011.03.036
介绍了蛋白质超滤分离快速优化新技术、新方法,包括脉冲进样技术,载体相超滤技术、参数连续变化超滤技术以及在这些技术基础上建立的超滤分离快速优化新方法,克服了常规蛋白质超滤分离过程优化中存在的实验工作量大、蛋白质消耗多、费时以及费用高等缺点.利用该方法对以溶菌酶和卵清蛋白为模型蛋白质的混合体系进行了研究,筛选出合适的超滤膜,优化了分离条件.结果表明,在本研究实验条件范围内,30 kDa Biomax膜要优于30 kDaYM膜.利用30 kDa Biomax膜对溶菌酶和卵清蛋白的超滤分离可取得较好的效果,采用载体相超滤技术经240min后透过液中溶菌酶的纯度＞90％,回收率＞92％.
关键词:
超滤
,
蛋白质
,
分离
,
优化
,
溶菌酶
焦小光
,
陈向荣
,
马光辉
,
苏志国
,
万印华
膜科学与技术
doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2008.05.003
提出一种利用浓差极化原理超滤浓缩生物大分子溶液的新型膜过程,即用自行设计的浓缩液汲取装置,抽提出浓差极化层内的浓溶液.以牛血清蛋白(BSA)为模型大分子,考查了汲取速率、透过通量对浓缩液浓度的影响,提出了动态平衡时浓缩液浓度的计算公式,并发展了一种可获得较高浓度浓缩液的周期性短时间歇汲取工艺,同时将新型膜浓缩过程与常规超滤浓缩进行了对比.结果表明,浓缩液浓度随汲取速率减小而增大,高通量不利于高浓度浓缩液的汲取;动态平衡时浓缩液浓度的计算值与测定值吻合良好;采用周期性短时间歇汲取工艺浓缩液浓度可达34.9 g/L,为原料液浓度的69.8倍;与常规超滤浓缩相比,该浓缩过程膜污染显著减轻,可实现连续操作.
关键词:
超滤
,
浓差极化
,
浓缩
,
蛋白质
,
汲取
,
动态平衡
张建东
,
苏志国
,
欧阳藩
膜科学与技术
doi:10.3969/j.issn.1007-8924.2001.05.011
蛋白质对膜的污染是限制微滤效率的关键因素之一.迄今为止虽然已就膜污染的机理进行了广泛研究,但是,还没有一种比较完善的方法直接对污染的微滤膜上的蛋白质进行定量.文章建立了一种简便的测定微滤膜上污染的蛋白质量的方法.被蛋白污染的膜首先用氨基黑10B染色,再在脱色液中脱色,最后用洗脱液洗脱结合到膜上的染料.在620*!nm处测定洗脱液的吸光度.根据吸光度计算膜上蛋白的量.并就3种膜(纤维素膜,Druapore GVWP膜和核孔膜)和4种蛋白质(牛血清白蛋白,牛血红蛋白,溶菌酶和卵清蛋白)进行实验,测定了点样、堆积和吸附3种条件下洗脱液吸光度和膜上蛋白量的关系,均呈较好线性.但不同蛋白质之间存在一定差异.
关键词:
膜污染
,
蛋白质定量
,
微滤
