王晖
,
段继诚
,
袁辉明
,
张丽华
,
张维冰
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.04.001
基于碱性磷酸酶的去磷酸化作用,发展了一种可改善多磷酸化肽电喷雾质谱检测效果的技术.将β-酪蛋白酶解产物用TiO2柱富集后,用碱性磷酸酶进行处理,并经微柱液相色谱分离后采用串联质谱进行鉴定.通过谱图中存在相对分子质量与根据氨基酸序列预计的单磷酸化肽相差80的色谱峰,可以证实样品中含有单磷酸化肽.此外,经碱性磷酸酶处理后的样品的色谱峰数目的增加,说明样品中可能存在多磷酸化肽段.通过控制去磷酸化反应的程度,使四磷酸化肽的部分磷酸基团被去除,从而可以推断其中3个磷酸化位点可能处于氨基酸残基序列的第17、18和19位.
关键词:
微柱液相色谱
,
电喷雾串联质谱
,
多磷酸化肽
,
磷酸化位点
,
碱性磷酸酶
周愿
,
张珅
,
袁辉明
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.01002
为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度，构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器（hIMER）和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱（nanoRPLC-ESI-MS / MS）组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1：1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能，发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90％；蛋白质经 hIMER 在线酶解10 min 产生的漏切及酶解产物在 hIMER 柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小，所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析，发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达，15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。
关键词:
集成化蛋白质组定量分析平台
,
蛋白质标记
,
定量蛋白质组学
,
亲水型固定化酶反应器
