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高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷及其代谢物的含量

朱会宇 , 吴丹妮 , 汪海林

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08031

研究了三磷酸腺苷( ATP)及其代谢物在细胞内的含量以及2?叔丁基?1,4?苯醌( TBBQ)对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法( HPLC)用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物(二磷酸腺苷( ADP)和一磷酸腺苷( AMP))的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱,采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol/L磷酸氢二钠和15 mmol/L三甲胺( TEA),用醋酸( HAc)调节pH至7?88;流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线,相关系数高(R2≥0?9996), MRC?5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围(0?1~100μmol/L)内。该方法检出限低。采用预冷的80%(体积分数)甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC?5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,结果表明,TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响,但 TBBQ浓度和 ATP、ADP以及 AMP在MRC?5细胞内浓度的关系比较复杂。

关键词: 高效液相色谱 , 三磷酸腺苷 , 醌类 , 代谢产物 , 细胞内

基于微悬臂梁生物传感器检测三磷酸腺苷

李辉彦 , 白效静 , 王风红 , 李静 , 唐纪琳

应用化学 doi:10.11944/j.issn.1000-0518.2015.03.140437

基于适配子构建了无标记检测三磷酸腺苷(ATP)的微悬臂梁生物传感器.将ATP适配子修饰在微悬臂梁阵列中的传感悬臂镀金面上,用来识别ATP,而参比悬臂修饰巯基己醇(MCH)防止非特异性吸附.ATP与其适配子发生特异性相互作用,使悬臂的上下两个表面产生应力差,导致传感悬臂产生偏转,扣除参比悬臂偏转后其偏转值与ATP的浓度在0.5~5 mmol/L范围内有良好的线性关系,相关系数为0.998,最低检出限为0.06 mmol/L.该微悬臂梁生物传感器响应快速、操作简单,并且对ATP具有良好的特异性.

关键词: 三磷酸腺苷 , 适配子 , 微悬臂梁生物传感器 , 表面应力

辐射诱导的DNA修复与细胞凋亡的ATP调控

周清明 , 张红 , 党秉荣 , 李文建 , 刘兵 , 闵凤玲 , 段昕 , 谢漪

原子核物理评论 doi:10.3969/j.issn.1007-4627.2005.02.015

综述了DNA辐射损伤导致的细胞阻遏于G1期以及在该时期对DNA的修复活动, 提出了较大剂量辐射诱导的三磷酸腺苷不足导致细胞凋亡的假说, 并分析了细胞走向凋亡与修复的辨正关系.

关键词: p53 , 辐射 , 三磷酸腺苷 , 凋亡

反相离子对高效液相色谱法测定心肌组织中的三磷酸腺苷

张燕婉 , 龙村 , 史世勇

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2000.04.010

采用反相离子对高效液相色谱法测定心肌组织中三磷酸腺苷(ATP)的含量.样品经高氯酸溶液沉淀蛋白,上清液用KOH溶液中和后用反相离子对高效液相色谱法分离测定.色谱柱为Spherisorb ODS2柱,流动相为甲醇-KH2PO4缓冲液(内含5 mmol/L IPR-A离子对试剂),在259nm波长处检测.方法最低检测限为2 mg/L,在5 mg/L~100 mg/L范围内有良好的线性关系(r=0.999 8),方法的回收率为97.8%~104%,日内精密度<4.85%,日间精密度<8.81%.方法准确、灵敏、快速,适用于动物和人心肌组织中ATP含量的测定.

关键词: 反相离子对高效液相色谱法 , 三磷酸腺苷 , 心肌组织

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