张权青
,
张磊
,
高小迪
,
张维冰
,
张庆合
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.09019
发展了一种大体积循环进样方法，用于富集低丰度蛋白质。在优化的色谱分离条件下，通过增加蛋白质样品的上样体积提高低丰度蛋白质的绝对含量；进一步采用增加样品进样循环次数的方法提高蛋白质的富集效率。以猪肝提取蛋白质为样品，每次上样量500μL 的大体积11次循环进样。根据色谱峰的信号强弱，选择了在原始谱图中看不到色谱峰、有较少小峰和有较多小峰出现的时间段等有代表性的馏分进行研究。在中等极性的组分中，保留时间为11.38 min 和12.58 min 组分的富集效率分别提高了52倍和61倍，实验结果与理论富集效率相近。所发展的方法为生物蛋白质样品研究提供了一种新的富集制备及检测方法。
关键词:
大体积进样
,
循环
,
蛋白质
,
低丰度
,
猪肝
,
富集
邓楠
,
梁振
,
边阳阳
,
张明建
,
张柯
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.10012
基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法.采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒(MNP@ssDNA)材料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质.比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESI-MS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析.结果表明,MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29.5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性(26.7%).血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21.31%(洗脱体系1)和26.20%(洗脱体系2).在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中的质量浓度约为0.29 ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到.结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路.
关键词:
随机寡核苷酸文库
,
血浆
,
蛋白质
,
高丰度
,
低丰度
,
谱图数量
