张明瑜
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08034
在生产和贮存低分子量肝素的过程中，糖链上的硫酸酯基团会被水解而损失活性，因此肝素样品中常可以检测到游离的硫酸根离子，此外在生产过程中还会引入其他阴离子。为了检测低分子量肝素的质量稳定性，常用离子色谱检测低分子量肝素中游离的阴离子。但是相对分子质量较大的低分子量肝素会污染离子色谱柱和抑制器。为此发展了一种灵敏的毛细管电泳方法用于测定低分子量肝素中游离的SO2－4、Cl－、F－、PO3－4和OAc－。不同于常用的背景吸收离子铬酸根，采用邻苯二甲酸根作为背景吸收电解质。与铬酸根相比，邻苯二甲酸根与所有待测阴离子电泳淌度匹配得更好，因此可以获得较窄的峰形。而且邻苯二甲酸根在230 nm检测波长下的摩尔吸光系数（4754 L／（mol·cm））比铬酸根（254 nm，2400 L／（mol·cm））高。因此，可以将毛细管电泳检测阴离子的灵敏度提高到与离子色谱法相当的水平。通过验证，该方法在0?002～1 mmol／L的浓度范围内具有较好的线性关系，日内（ n＝6）和日间（ n＝3）迁移时间和峰面积的相对标准偏差均小于3％。所测阴离子的检出限（ S／N＝3）和定量限（ S／N＝10）分别为0?4～0?8μmol／L和2～4μmol／L。该方法可用于监测低分子量肝素的稳定性。
关键词:
毛细管电泳
,
阴离子分析
,
低分子量肝素
,
稳定性监测
张倩倩
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04029
发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法.利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa (FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性.首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间.底物被FXa水解,产生游离的pNA.体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰.该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测.
关键词:
体积排阻色谱
,
抗凝血因子Xa
,
低分子量肝素
