吴艳芳
,
李晓鸽
,
车铁军
,
朱智甲
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.10005
建立了用于分离并定量测定低分子量硫酸化多糖中不同糖链数的各个组分分布比例的体积排阻色谱方法.系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响.最佳分离条件:两支TSK-GELG2000 SWxl色谱柱(300 mm×7.8 mm)串联,流动相100 mmol/L Na2HP04-NaH2PO4(pH 7.0),流速0.5mL/min,柱温35℃,进样量5μL,样品质量浓度10 g/L.在最佳的分离条件下,可以将低分子量硫酸化多糖样品中不同糖链数的各个组分分离并对各个组分的分布进行了定量分析.用该方法对美国药典标准品(USP)、商品和实验室制备的低分子量硫酸化多糖糖链数分布进行了定量化比较,证明该方法可用于低分子量硫酸化多糖类药物的组成成分的质量控制.
关键词:
体积排阻色谱
,
低分子量硫酸化多糖
,
组成分布
,
质量控制
张倩倩
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04029
发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝素(LMWH)抗凝血活性的方法.利用肝素与抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)结合后可增强ATⅢ对凝血因子Xa (FXa)抑制作用的原理,通过测定加入LMWH后FXa水解其生色底物产生对硝基苯胺(pNA)这一反应的抑制程度确定LMWH的活性.首先将含有一定浓度LMWH的缓冲溶液与ATⅢ溶液混合,然后依次加入FXa和生色底物,分别孵育一段时间.底物被FXa水解,产生游离的pNA.体积排阻色谱可将小分子产物pNA与其他大分子分离开,因而可以在pNA的最大吸收波长下得到高灵敏度的测定,并且不再受其他成分的干扰.该方法重复性好,灵敏度高,极大地减少了样品的消耗量,降低了成本,并且还可进行各种复杂样品(如血浆)中LMWH抗FXa活性的监测.
关键词:
体积排阻色谱
,
抗凝血因子Xa
,
低分子量肝素
