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基于核酸外切酶I的适配体荧光传感器检测人尿液中的Hg²⁺

分析化学 doi:10.11895/j.issn.0253-3820.160029

基于富含胸腺嘧啶(T)DNA适配体对Hg²⁺的特异性识别和核酸外切酶I(Exo Ⅰ)辅助的信号转换策略,建立了快速检测人尿液中Hg²⁺的荧光分析方法。固定在微孔板上的DNA适配体特异识别Hg²⁺后,折叠成稳定的发卡型双链结构,不能被单链特异性的Exo Ⅰ水解,核酸染料SYBR Green I(SG)插入发卡部位产生荧光信号,基于此可实现Hg²⁺的定量检测。优化后的最佳实验条件为:微孔板包被亲和素浓度为50 mg/L;检测DNA包被浓度为75 nmol/L;使用5×@SG以及1.2μL的Exo Ⅰ。在最佳实验条件下,体系荧光强度与Hg²⁺浓度的对数呈良好线性关系,线性范围为2-500 nmol/L,检出限为1.5 nmol/L(3σ)。利用本方法检测尿样中的Hg²⁺,加标回收率为91.2%-95.0%,相对标准偏差(n=5)为2.1%-4.6%。本方法选择性良好,操作简单,用HNO₃-KMnO₄溶液将尿液中其它形式的汞氧化为Hg²⁺后,成功实现了尿液中总汞含量的检测。