杜蓉
,
陈保文
,
郭磊
,
李阳
,
谢剑炜
,
王国治
,
周宏兵
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.05.002
采用反相高效液相色谱法(HPLC)构建了49种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹图谱库,并对分枝杆菌进行分型鉴定.菌株经培养(对于慢生长分枝杆菌培养3周,快生长分枝杆菌培养1周)后,取两植菌勺的量,皂化1h后,于4℃下储存.通过酸化方法提取分枝菌酸.并用4-溴苯甲酰基溴衍生化,以HPLC分析分枝杆菌衍生物,并以其峰形的分布及峰的相对保留时间、相对峰高为指标对分枝杆菌进行分型鉴定.该法重现性良好,各峰保留时间的相对标准偏差为0.13%～1.07%.根据构建的49种<伯杰细菌鉴定手册>中所载入的分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱库,发现不同菌种的分枝菌酸的指纹图谱分别具有单簇峰、双簇峰、三簇峰(含多簇峰)的特征.依据相对保留时间和相对峰高的不同,对49种分枝杆菌中的41种进行了分型.结果表明,所建立的反相HPLC法可快速准确地对分枝杆菌进行分型鉴定.
关键词:
反相高效液相色谱法
,
分枝菌酸
,
指纹图谱
,
分枝杆菌
,
分型
,
鉴定
,
结核分枝杆菌
黎源倩
,
王国庆
,
米建萍
,
周颖
,
曾红燕
,
张朝武
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.01.024
建立了毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测(CE-LIFD)分析分枝杆菌脱氧核糖核酸(DNA)限制性内切酶谱的新方法.用聚合酶链反应(PCR)扩增分枝杆菌hsp65基因的长度为439 bp的片段,该扩增片段经限制性内切酶BstEⅡ和HaeⅢ酶切后,分别用CE-LIFD装置和常规琼脂糖电泳(AGE)对比检测酶切片段.对PCR扩增片段的酶切样品的预处理和CE条件进行了优化,获得了8种分枝杆菌DNA的限制性内切酶谱图.DNA片段相对迁移时间的相对标准偏差(RSD)≤3.6%.结果表明,CE的分离效能明显高于AGE,是研究DNA限制性内切酶谱的更有效的检测手段.
关键词:
毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
限制性内切酶谱
,
分枝杆菌
