贾兴元
,
吴安石
,
岳云
,
刘敬忠
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.01.009
用所建立的微柱高效液相色谱分离、柱后固定化酶反应器酶解、电化学检测器检测的方法,对用不同浓度异氟醚麻醉前后的大鼠脑微透析液中的乙酰胆碱和胆碱的浓度进行了测定.在乙酰胆碱和胆碱的浓度为10～2 000 nmol/L时,其浓度分别与各自相应峰高的线性关系良好,两者的检测限(以信噪比为3计)均可达5 nmol/L.微透析液中乙酰胆碱和胆碱的含量在大鼠清醒时最高,随着异氟醚吸入浓度的增加,乙酰胆碱和胆碱含量明显降低.在大鼠海马和脑皮层中乙酰胆碱浓度的降低与大鼠吸入异氟醚的浓度相关(P＜0.05).研究结果表明,异氟醚麻醉剂抑制大鼠大脑皮层和海马中乙酰胆碱的释放程度与其剂量有关.
关键词:
高效液相色谱法
,
微柱
,
固定化酶反应器
,
乙酰胆碱
,
胆碱
张姣
,
周廉淇
,
田芳
,
张养军
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.10019
研究了以不同粒径的磁性颗粒为载体的固定化酶反应器在蛋白质酶解过程中,其粒径大小对团聚、酶解效率和漏切位点等的影响.实验结果表明,纳米级颗粒的酶负载量为亚微米级的3.5倍左右.但当酶固定量相同时,酶解效率基本相当.而在一定程度上加大磁性颗粒的粒径后,团聚现象得到明显改善.选择磁性载体粒径为20nm的固定化酶反应器,对其性能进一步考察.结果显示胰蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)的质量比为1∶1时,即能于1 min内实现快速酶解；当酶解10 min时,其零漏切位点肽段数和蛋白质序列覆盖率基本达到稳定,并明显优于溶液酶解水平.通过对漏切位点的统计分析比较,发现固定化酶解与溶液酶解时的漏切位点规律基本类似.因此,采用不同粒径磁性载体制备的固定化酶反应器均可在蛋白质组学研究中提供快速、高效的酶解.
关键词:
磁性颗粒
,
固定化酶反应器
,
蛋白质组学
,
蛋白质酶解
周廉淇
,
张姣
,
田芳
,
张养军
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.10030
针对传统溶液酶解存在的酶解时间较长、酶自切物干扰以及蛋白酶不能重复使用等缺陷,通过电子转移生成催化剂的原子转移自由基聚合法修饰银丝,并以其为载体制备了一种新型的固定化酶反应器.用质谱考察了银丝固定化酶反应器(SW-Trypsin)的酶解效率、重复性和回收率.结果表明:绒毛状聚合物修饰的SW-Trypsin的酶解效率较高,酶解标准蛋白牛血清白蛋白(BSA)20 min后,肽段的氨基酸序列覆盖率可达93％,高于传统溶液酶解方法酶解16h所得79％的覆盖率.使用该固定化酶反应器于一个月内8次酶解BSA所得的氨基酸序列覆盖率在89％到97％之间,平均覆盖率为94％,显示出良好的稳定性.另外,该固定化酶反应器酶解马心肌红蛋白(MYO)的回收率为87.67％.最后,用SW-Trypsin酶解腾冲嗜热菌全蛋白20 min,所鉴定到的氨基酸序列覆盖率和蛋白数量与同样条件下溶液酶解16h的结果接近,且零漏切位点肽段的比例更高.加之容易分离的优点,SW-Trypsin在蛋白质组学的应用中具有良好的前景.
关键词:
原子转移自由基聚合反应
,
蛋白质组学
,
质谱
,
固定化酶反应器
,
银丝
张凌怡
,
王兵兵
,
上官露露
,
张润生
,
陈建虎
,
张维冰
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.06028
固定化酶反应器作为蛋白质组学研究中“bottom-up”策略重要的组件，具有酶解快速、酶解效率高、酶稳定性和活性高、简单易操作、能够与多种检测方式联用等优点，对于发展高效快速的蛋白质组学分析方法具有重要意义。本文就固定化酶反应器的制备方法及其在蛋白质组学中的应用做简单的概述，着重介绍酶的固定方法、固定化酶的载体、用于固定的酶的种类。近几年固定化酶反应器的研究集中于提高固酶量、保持酶活性、增加酶解效率、减小非特异性吸附等方面。研究结果表明，采用纳米材料、整体材料等新型载体，提高载体亲水性，采用多酶同时酶解等方法能够有效改善固定化酶反应器的性能，提高蛋白质的鉴定效率。
关键词:
固定化酶反应器
,
酶
,
载体材料
,
蛋白质组学
,
制备
