周艳卿
,
蒋小岗
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.04024
Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法，该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用，该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端，并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性，本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下，组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法，可以更准确地利用Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。
关键词:
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
液相色谱-串联质谱
,
Edman降解
,
异硫氰酸苯酯
,
模型肽
,
组氨酸
陈刚
,
白泉
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.05.001
通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(Con A),制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好.对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B(RNase B)为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RNase B用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RNase B的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式.该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征.将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果.
关键词:
伴刀豆球蛋白
,
亲和色谱
,
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
糖蛋白
,
核糖核酸酶B
,
蛋白质组学
夏树华
,
王璋
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.01.012
运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5 μmol/L,基本为单一肽组分.对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/ESI-MS)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-Glu-Ile-Trp(KEIW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律.经过对两种方法分析过程的比较,认为ESI-MS可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALDI-TOF MS可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.000 1),从而可以得到确定的肽的序列.
关键词:
反相高效液相色谱法
,
电喷雾离子质谱
,
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
血管紧张素转换酶抑制肽
,
螺蛳
皮建辉
,
全妙华
,
曾雄智
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.03.025
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相化学合成了海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ,并优化了其最佳氧化复性条件.最佳的氧化复性条件为pH 7.5的重蒸水溶液体系,样品质量浓度为0.1 g/L,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的浓度分别为1.0 mmol/L和0.1 mmol/L、L-Arg浓度为1.0 mol/L.复性产物经质谱测定其相对分子质量为3 607.68;与天然毒素等量混合后用高效液相色谱分析得到单一峰;膈神经-膈肌标本生理实验结果表明,合成的毒素具有与天然毒素相同的生物学活性,从而可确定二者在结构与功能上具有一致性.
关键词:
固相化学合成
,
海南捕鸟蛛毒素-Ⅲ
,
氧化复性
,
结构与功能
,
反相高效液相色谱
,
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
牟青
,
张英
,
黄琳娟
,
王仲孚
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.01.004
建立了以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)为衍生化试剂对寡糖的标记方法.寡糖的还原端与AEC的伯氨基反应生成烯胺,再被NaBH,CN还原为二级胺,使得寡糖被AEC标记.衍生物通过反相高效液相色谱分离纯化,采用的色谱柱为Waters Symmetry C18柱(3.9 mm ×150 mm,5μm),乙腈和乙酸铵水溶液(pH 4.5)为流动相,梯度洗脱,在254 nm波长处检测,并以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析.在此衍生化条件和色谱条件下,葡寡糖衍生物分离良好,并且AEC衍生可显著提高葡寡糖的质谱检测灵敏度.该方法适用于寡糖的分离纯化和结构分析,并与生物质谱具有良好的兼容性,表明该方法在微量寡糖链分析方面有广阔的应用前景.
关键词:
高效液相色谱(HPLC)
,
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
3-氨基-9-乙基咔唑
,
寡糖
周艳卿
,
蒋小岗
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.04024
Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法，该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用，该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端，并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性，本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF-MS）和液相色谱-串联质谱（ LC-MS／MS）研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下，组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法，可以更准确地利用 Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。
关键词:
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
,
液相色谱-串联质谱
,
Edman降解
,
异硫氰酸苯酯
,
模型肽
,
组氨酸
