李茜
,
陈蓉
,
孙毓庆
,
胡育筑
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.01.021
在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸(PO-ODNs)及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸(PS-ODNs)药物"癌泰得"系列样品(18～20 mers)进行分离,并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电压、温度等因素对样品单碱基分离的影响.其中缓冲溶液的pH对分离起决定性的作用,而添加剂尿素的加入显著提高了PS-ODNs样品的分离度.结果表明,采用未涂层弹性石英毛细管(50 μm,总长49.0 cm,有效长度40.7 cm),以50 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸(pH 2.24)-7 mol/L尿素为缓冲溶液,压力进样(2 kPa×10 s),负极进样,正极检测,在分离电压-20 kV、柱温25 ℃、检测波长260 nm条件下,可实现寡核苷酸及硫代反义寡核苷酸混合样品的单碱基分离.PO-ODNs的18～19 mers及19～20 mers样品的平均分离度分别为4.68,3.20;PS-ODNs的18～19 mers及19～20 mers样品的平均分离度分别为1.23及0.81.该法操作简单,重现性好,可为反义寡核苷酸药物的分析提供借鉴.
关键词:
低pH
,
毛细管区带电泳法
,
寡核苷酸
,
硫代反义寡核苷酸
