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新型荧光衍生试剂用于尿样中痕量游离雌二醇和雌三醇的反相高效液相色谱-荧光检测和质谱定性

赵怀鑫 , 孙志伟 , 夏莲 , 孙学军 , 索有瑞 , 李玉林 , 尤进茂

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.02.007

合成了新型高灵敏度的荧光标记试剂10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯(EASC).采用EASC柱前衍生化实现了雌二醇(E2)和雌三醇(E3)的反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光分析及柱后质谱鉴定.试剂EASC比丹磺酰氯(DNS-Cl)具有更高的紫外、荧光和质谱检测灵敏度,其荧光发光强度是丹磺酰氯的 1000 倍以上.EASC与E2和E3在NaHCO3缓冲液(pH 10.5)中,于60 ℃下反应 3 min 即可获得稳定的荧光产物,最大激发波长(λex)和最大发射波长(λem)分别为270 nm和430 nm.所建立的方法具有良好的重现性,线性回归系数大于 0.9990;检出限(S/N=3)为31 fmol 和40 fmol.对实际根田鼠尿样中的雌二醇和雌三醇含量进行了测定,结果令人满意.

关键词: 10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯 , 柱前衍生 , 反相高效液相色谱 , 丹磺酰氯 , 雌二醇 , 雌三醇 , 尿

柱前衍生高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸及y-氨基丁酸

涂云飞 , 杨秀芳 , 张士康 , 朱跃进

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2011.10037

对茶叶中的茶氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)建立了柱前衍生方法,并利用高效液相色谱法(HPLC)对衍生物进行了测定.采用邻苯二甲醛(OPA)及N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)为衍生试剂,考察了脯氨酸(Pro)、茶多酚(Tp)及维生素C(Vc)等对衍生体系的影响,并对色谱分离条件进行了优化.结果表明,茶氨酸与GABA衍生物在色谱柱上的保留行为与分离效率主要受流动相pH及缓冲盐浓度的影响；Pro、Tp及Vc对茶氨酸的衍生产率影响较小.而Vc可以提高GABA检测的灵敏度,并能稳定衍生用储备液.GABA与茶氨酸衍生后的方法检出限(LOD)分别为3.01×10-5 mmol/L和7.98×10-5 mmol/L;定量限(LOQ)分别为9.99×10-5 mmol/L和2.658×10-4mmol/L;线性范围分别为0.01～0.4 mmol/L(相关系数为0.996)和0.05～0.8 mmol/L(相关系数为0.995)；方法的回收率分别为99.29％～119.60％和93.18％～141.06％(除本身含茶氨酸量高的绿茶中回收率为62.88％外).这说明经优化的柱前衍生-高效液相色谱体系可用于茶叶中两种特征性氨基酸的测定.

关键词: 高效液相色谱 , 柱前衍生 , γ-氨基丁酸 , 茶氨酸 , 茶 , 邻苯二甲醛 , N-乙酰-L-半胱氨酸

毛细管电泳法分析藏红花植物细胞多糖中单糖组成

马海宁 , 华玉娟 , 屠春燕 , 袁丽红 , 韦萍

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2011.11015

以对甲氧基苯胺为衍生试剂,采用毛细管电泳法分析了藏红花植物细胞多糖中的单糖组成.对衍生条件进行了优化,并对毛细管分离条件进行了系统的研究.衍生反应在醋酸含量9.5％ (v/v)、80℃下反应2h的衍生产率最大,衍生产物紫外检测波长234 nm.在优化的毛细管电泳分离条件(未涂层熔融石英毛细管柱(60 cm(有效长度50 cm)×50μm),柱温25℃,电压20 kV,使用350 mmol/L硼酸电解液(pH 10.21),压力(3.447 5 kPa)进样5s)下,基线分离了11种结构相近的醛糖(来苏糖、木糖、核糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、纤维二糖、麦芽糖、乳糖)、酮糖(果糖)的衍生产物.应用该方法定量检测了藏红花植物细胞多糖水解物中糖的成分,各糖的回收率为94.3％～105.4％,相对标准偏差为3.3％～4.6％.

关键词: 毛细管电泳 , 对甲氧基苯胺 , 柱前衍生 , 单糖 , 酮糖 , 多糖 , 藏红花

基于柱前衍生-超高效液相色谱-质谱联用技术的植物提取液中氨基化合物代谢谱分析

张俊杰 , 赵春霞 , 赵燕妮 , 赵洁妤 , 李丽丽 , 路鑫 , 许国旺

色谱 doi:10.3724/SP.J.1123.2015.01028

氨基化合物在植物生长发育中起着重要作用。本文建立了一种基于柱前衍生-超高效液相色谱-质谱联用技术的植物提取液中氨基化合物代谢谱的分析方法。以烟草鲜叶为例，共检测出87种氨基化合物。其中43种氨基化合物的定量分析结果表明，方法的线性相关系数在0.993~0.999之间，线性范围可达到4个数量级，检出限为0.03~6.58 ng／mL，日内、日间精密度分别为0.7％~15.6％、0.8％~22.9％，回收率为74.4％~122.7％。采用该方法考察了打顶对不同部位烟草鲜叶中氨基化合物代谢谱的影响，结果显示打顶处理对上部叶影响最大，打顶后上部叶氮代谢主要流向生物碱合成方向。该方法充分利用了三重四极杆串联质谱和高分辨串联质谱技术的优势，可实现植物提取液中氨基代谢物的高选择性、高灵敏度分析。

关键词: 柱前衍生 , 超高效液相色谱 , 四极杆飞行时间质谱 , 三重四极杆质谱 , 氨基化合物 , 代谢谱 , 植物提取液

离子对反相色谱法同时测定钢铁及合金中锆和铪

彭霞 , 胡晓燕

冶金分析 doi:10.3969/j.issn.1000-7571.2005.01.006

选用Zr(Hf)-F-5-Br-PADAP体系进行锆和铪的高灵敏度显色反应,确定了柱前衍生、色谱分离及测定的最佳条件.考察了5-Br-PADAP的浓度、pH值、流动相、流动相的组成及显色时间对锆和铪络合物及色谱分离的影响.选用乙腈和水的混合液为流动相,流动相中对离子试剂NaF的浓度为1.5×10-4～3×10-4mod/L,pH 4.2±0.2;用C18作为分离柱,峰面积与样品浓度线性范围为Zr:1.6～200 μg/L,Hf:1.3～200 μg/L,分离度1.84.方法的检测限为Zr:12.1 μg/g,Hf:9.92 μg/g.此方法用于合成钢样中锆和铪的直接测定,结果令人满意.

关键词: 反相色谱法 , 5-Br-PADAP , 柱前衍生 , 锆 , 铪

柱前衍生-酸诱导瞬时等速堆积柱上富集毛细管电泳法测定巯基化合物

黄征 , 张红医

分析化学 doi:10.11895/j.issn.0253-3820.151021

建立了柱前衍生-酸诱导瞬时等速堆积柱上富集毛细管电泳测定巯基化合物的方法。在Tris-HCl缓冲溶液(pH=8.15)中,巯基化合物与2-氯-1-甲基碘化吡啶在室温条件下反应10 min;随后,将反应混合物引入到充满40 mmol/L甲酸盐背景电解质溶液(pH=3.96)的毛细管柱内;最后,向毛细管柱中引入适量稀H₂SO₄溶液。当在毛细管柱两端施加正向电压时,衍生的巯基化合物就会经瞬时等速堆积电泳过程而发生富集,其中前导和尾随离子分别为H⁺和Tris⁺。以半胱氨酸和巯基乙酸为分析对象,检测波长设为312 nm,优化了酸诱导瞬时等速堆积柱上富集的各种实验条件。在最佳条件下,半胱氨酸和巯基乙酸的线性范围分别为10~100 mg/L和4~100 mg/L,检出限分别为0.2和0.4 mg/L。本方法用于脱毛膏中巯基乙酸的测定,结果令人满意。

关键词: 巯基化合物 , 半胱氨酸 , 巯基乙酸钠 , 柱前衍生 , 柱上富集 , 毛细管电泳

5,5′-二硫硝基苯甲酸柱前衍生高效液相色谱法测定酶促反应液中的L-半胱氨酸

刘忠 , 杨文博 , 金永杰 , 白钢

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.03.010

以5,5′-二硫硝基苯甲酸(DTNB)为柱前衍生试剂对酶促反应液进行衍生化,用C18色谱柱在室温下采用二元梯度洗脱,于330 nm波长下检测,同时以2-巯基乙醇和二硫苏糖醇(DTT)为对照,对L-半胱氨酸的分离峰进行确认,并对酶促反应液中的L-半胱氨酸进行分离测定.L-半胱氨酸浓度为5～950 μmol/L时,其浓度与峰面积呈显著的线性关系.高、中、低浓度水平的L-半胱氨酸加标回收率为99.7% ～100.5% ,相对标准偏差小于1.3% ,检测限为0.8 μmol/L.方法简便、快速、可靠.用于样品分析,结果令人满意.摘要:以5,5′-二硫硝基苯甲酸(DTNB)为柱前衍生试剂对酶促反应液进行衍生化,用C18色谱柱在室温下采用二元梯度洗脱,于330 nm波长下检测,同时以2-巯基乙醇和二硫苏糖醇(DTT)为对照,对L-半胱氨酸的分离峰进行确认,并对酶促反应液中的L-半胱氨酸进行分离测定.L-半胱氨酸浓度为5～950 μmol/L时,其浓度与峰面积呈显著的线性关系.高、中、低浓度水平的L-半胱氨酸加标回收率为99.7% ～100.5% ,相对标准偏差小于1.3% ,检测限为0.8 μmol/L.方法简便、快速、可靠.用于样品分析,结果令人满意.

关键词: 高效液相色谱法 , 5,5′-二硫硝基苯甲酸 , 柱前衍生 , L-半胱氨酸 , 酶促反应液

柱前衍生反相高效液相色谱法测定减肥药中的芬氟拉明

翦英红 , 马言顺 , 龙远德 , 黄天宝

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2004.04.044

关键词: 反相高效液相色谱法 , 柱前衍生 , 3,5-二硝基苯甲酰氯 , 芬氟拉明

脂肪胺的高效液相色谱分离及质谱鉴定

陈向明 , 石运伟 , 赵先恩 , 张海峰 , 尤进茂

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2005.06.016

采用新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙酸(BCAA)为柱前衍生化试剂,在Hypersil BDS-C18色谱柱上,通过梯度洗脱对12种游离脂肪胺进行了分离和在线质谱定性.以乙腈为溶剂,1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)环己碳二亚胺(EDAC)为缩合剂,在50 ℃条件下衍生反应15 min后获得稳定的荧光产物.激发波长和发射波长分别为333 nm和390 nm.采用大气压化学电离源(APCI)的正离子模式,实现了土壤和污水中脂肪胺的定性及其含量的测定.脂肪胺的线性相关系数大于0.999 3,检测限为12～28 fmol.

关键词: 高效液相色谱-质谱 , 荧光检测 , 柱前衍生 , 脂肪胺

荧光衍生试剂1-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]-2-苯基咪唑[4,5-f]9,10-菲的合成及其在长链脂肪酸分析中的应用

赵先恩 , 索有瑞 , 丁晨旭 , 朱芳 , 孙菁 , 赵文臣 , 孙学军 , 尤进茂

色谱 doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.05.007

合成了新的荧光衍生试剂1-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]-2-苯基咪唑[4,5-f]9,10-菲(TSEPIP),并将其作为柱前衍生化试剂,在Eclipse XDB-C8色谱柱上采用梯度洗脱实现了11种长链(C20～C30)游离脂肪酸(FFA)衍生物的基线分离.利用柱后在线的串联质谱并以大气压化学电离源(APCI)的正离子模式实现了各组分的质谱定性.对土壤及3种苔藓(东亚毛灰藓、锦丝藓、羽平藓)中FFA组分的定量结果表明,苔藓植物从土壤中富集了大量的长链游离脂肪酸.荧光检测的激发波长和发射波长分别为260 nm和380 nm.线性回归系数大于0.9996,检测限为26.19～76.67 fmol.所建立的方法具有良好的重现性,对实际样品的测定结果令人满意.

关键词: 高效液相色谱-质谱法 , 荧光衍生试剂 , 荧光检测 , 柱前衍生 , 长链脂肪酸