韩彬
,
王平利
,
张丽华
,
屈锋
,
梁振
,
邓玉林
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.04.001
芯片自由流电泳对于来源稀少的重要生物样品的连续预分级和微制备具有重要的意义.本文在自由流芯片的微分离腔内,通过原位光引发聚合反应制备了聚丙烯酰胺整体材料,并进行了pH梯度的固定化,从而构建了基于固定化pH梯度整体(M-IPG)材料的芯片自由流等电聚焦模式(μFF-IEF).利用该新型分离模式,实现了异硫氰酸荧光素(FITC)标记的最小等电点相差0.33的甘氨酸、脯氨酸和赖氨酸混合物的分离,且分离结果优于传统的μFF-IEF.实验结果表明,通过发展基于M-IPG材料的μFF-IEF模式,不仅可以避免在缓冲溶液中添加两性电解质对后续采用其他模式分离和质谱鉴定的干扰,而且可以获得较高的分离和富集能力,有望在微量样品的连续分离和制备方面发挥重要作用.
关键词:
芯片自由流电泳
,
等电聚焦
,
固定化pH梯度
,
整体材料
,
氨基酸
李贤煜
,
赵新元
,
应万涛
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.02010
分泌蛋白质组(secretome)是指在特定的时空条件下,细胞、组织等分泌的全部蛋白质.分泌蛋白质组可能包含了大量的疾病诊断生物标志物,因此其相关研究越来越受到重视.分泌蛋白质组的组成高度复杂且浓度范围宽,这对分析方法提出了挑战.建立有效的蛋白质或肽段预分离策略,将有利于分泌蛋白质的高覆盖率鉴定.本研究以肝癌细胞系MHCC97L的无血清培养分泌蛋白质为研究对象,采用一种新型等电聚焦预分离(OFFGEL)系统,考察了肽段水平的分级对蛋白质鉴定结果的影响.结果表明,分离后各馏分中肽段的等电点分布与理论预测基本一致,每个馏分中单独鉴定的肽段比例接近80％,显示了该系统对肽段的高分辨分离能力结合生物质谱技术,在肝癌细胞分泌系统中鉴定了 2995个蛋门质,显示了该系统在复杂体系蛋白质组研究中的应用潜力.
关键词:
等电聚焦
,
预分离
,
分泌蛋白质组
,
分级
,
鉴定
,
肝癌细胞
