邹晓莉
,
黎源倩
,
曾红燕
,
周健
,
秦廷武
,
莫湘涛
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2006.03.012
建立了测定人肌腱中胶原蛋白含量的高效液相色谱法.动物肌腱中的胶原蛋白经酸水解后生成包括羟脯氨酸在内的氨基酸混合物,用2,4-二硝基氯苯对水解产物衍生化,然后以0.01 mol/L乙酸钠-乙酸缓冲液(pH 6.0)-乙腈(体积比为80∶20)为流动相,经反相C18柱分离,紫外检测器于360 nm波长处检测来测定羟脯氨酸的含量.羟脯氨酸是胶原蛋白的特异性氨基酸且含量稳定,因而可通过样品中羟脯氨酸的含量来计算胶原蛋白的含量.该方法对羟脯氨酸的检出限为3 μg/L,羟脯氨酸为3 μg/L～100 mg/L时与峰面积的线性关系良好;样品测定的相对标准偏差为1.95% ,加标回收率为98.4% ～110.8% .对60份人肌腱样品中胶原蛋白的含量进行了测定.所建立的方法灵敏、准确、干扰少,适用于肌腱中胶原蛋白含量的测定.
关键词:
高效液相色谱法
,
羟脯氨酸
,
胶原蛋白
,
肌腱
夏金根
,
陈波
,
姚守拙
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.05.013
建立了一种简单、快速地测定胶原蛋白中羟脯氨酸(HYP)的高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI/MS)方法.胶原蛋白经酸水解后,以乙腈-0.05%的三氟乙酸水溶液(体积比为5:95)为流动相,以1.0 mL/min的流速在C8反相柱上进行分离.以茶氨酸为内标,利用质谱定性定量测定HYP.在电喷雾正离子模式下,对m/z 132和m/z 175离子进行选择离子监测.在11.7-117 mg/L范围内,HYP与内标物茶氨酸的峰面积比和HYP的质量浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.9993.含量测定的相对标准偏差为1.87%.回收率为97.85%～101.76%.此方法流动相简单,分析时间短且无需衍生处理,抗干扰能力强,能准确快速地测定胶原蛋白中HYP的含量.
关键词:
高效液相色谱-质谱
,
羟脯氨酸
,
胶原蛋白
