梁玉
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吴慈
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戴忠鹏
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梁作成
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梁振
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张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2011.00469
微流控芯片高效液相色谱-串联质谱系统具有高通量、高灵敏度等优点,已成为生物样品分析的热点领域之一.本文在玻璃芯片上以甲基丙烯酸十二酯(LMA)和三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TMPTMA)为单体,制备了以聚丙烯酸酯整体材料为固定相的捕集柱和分离柱.通过在芯片通道末端连接细内径的毛细管作为芯片-质谱接口,并以常规的液相色谱泵和微阀控制流体,构建了芯片反相液相色谱-电喷雾串联质谱(RPLC-ESI-MS/MS)平台,并将其用于分析牛血清白蛋白(BSA)的酶解产物.经过3次平行分析,BSA的序列覆盖率分别为39.37％、37.89％和34.10％(相对标准偏差为7.3％).采用不同批次制作的芯片构建RPLC-ESI-MS/MS平台,对BSA酶解产物进行分析,其序列覆盖率相当.上述结果表明,该平台具有灵敏度高和重现性好等优点,有望用于蛋白质样品的快速分离和高灵敏度鉴定.
关键词:
微流控芯片
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反相液相色谱
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串联质谱
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整体材料
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蛋白质分析
刘吉众
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黄嫣嫣
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杨博
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常建华
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刘国诠
,
赵睿
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.12005
以具有双孔结构的聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA)微球为基质,以葡萄糖进行表面亲水改性,制备了强阳离子交换色谱填料,并将其用于复杂生命体系中生物大分子的快速而高效的分离、分析与纯化.葡萄糖亲水改性增进了填料的生物相容性,提高了蛋白质样品的回收率；双孔结构及较高的比表面积赋予填料良好的柱渗透性和样品负载量.以标准蛋白质为样品,考察了该填料对生物样品的分离性能.以100mm×4.6 mm的色谱柱分离4种蛋白质,在6 min内实现了基线分离；以溶菌酶为样品,填料的吸附容量为39.5 g/L,在蛋白质快速分离纯化分析中显示了良好的应用前景.
关键词:
强阳离子交换
,
固定相
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聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球
,
葡萄糖改性
,
蛋白质分析
陆文渊
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张扬
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沈诚频
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殷薛飞
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刘晓慧
,
杨芃原
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.10030
在使用对二甲基亚砜（ DMSO）和 NEDD8激活酶抑制剂（ MLN4924，MLN）刺激的人脐静脉内皮细胞（ HU-VEC）内的蛋白质进行分析的过程中，利用 Progenesis LC-MS 软件对色谱图进行了保留时间的校正，并比较了同组分多次重复实验中的谱图相似率及两种刺激下细胞内蛋白质色谱图的相似度。样品经双酶切处理后，加入 Qcon-CAT 标准蛋白质混合物作为参照，经高效液相色谱-串级质谱分离，后续又对谱图进行了校正与分析。经过谱图校正，将蛋白质鉴定结果从7000个左右提高到8000个以上，提高了蛋白质的鉴定效率。在利用谱图计数进行相对定量时，还分析了 DMSO 和 MLN 分别刺激 HUVEC 后细胞内的蛋白质差异在1000个左右，并给出了校正后的色谱总离子流图的相似度比较。相比其他方法更为简单快捷和流程化，具有高通量高灵敏度的优点。
关键词:
高效液相色谱-串级质谱
,
谱图校正
,
蛋白质分析
