赵鹏
,
陶定银
,
梁振
,
张丽华
,
张玉奎
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2009.03.001
通过将展示单链抗体(scFv)文库的M13噬菌体固定于冷凝胶整体柱表面制备了一种新型蛋白质均衡器.由于展示的scFv片段具有种类多、数目大以及与蛋白质结合的特异性强等优点,因此其非常适合用于复杂蛋白质样品的预处理.将肾病患者尿蛋白在平衡器上反复上样5次后,依次使用2 mol/L NaCl、50 mmol/L Gly-HCl(pH 2.5)和凝血酶溶液洗脱与均衡器结合的蛋白质,收集各馏分,并采用串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱进行蛋白质的分离鉴定.与未经均衡器处理的样品相比,鉴定的蛋白质数目由142个提高到396个.此外,凝胶电泳的分析结果显示,在上样流出液中蛋白质的浓度差异明显变小,大量的高丰度蛋白质存在于NaCl洗脱液中.上述结果表明,基于M13噬菌体展示scFv文库的新型蛋白质均衡器能够有效减小样品中蛋白质的浓度差异,有利于发现更多的低丰度蛋白质.
关键词:
蛋白质均衡器
,
M13噬菌体展示单链抗体文库
,
串联微柱反相液相色谱-电喷雾质谱
,
蛋白质
,
肾病患者
,
尿
