周玮
,
刘晓慧
,
周新文
,
申华莉
,
杨芃原
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.05.004
基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱,以标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)、核糖核酸酶B(RNase B)为对象,探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程.通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤(包括蛋白变性方法(RNase B适合化学变性,HRP适合热变性)、酶的选择及条件(RNase B适用内蛋白酶Lys-C酶解,HRP适用胰蛋白酶酶解,酶解时间控制在12～16 h)、提肽液的组成(对于低丰度糖蛋白用50%乙腈-5%三氟乙酸提取)、基质的组成、点样方法("三明治"式))进行了优化,形成了简单易行、无需糖肽富集标记的糖蛋白溶液酶解-质谱分析和胶上分离酶解-质谱分析的技术路线,为实际样品体系中糖蛋白的结构解析提供了可行的方法.
关键词:
糖蛋白结构
,
质谱解析
,
样品前处理
,
条件优化
