吴丹
,
王超展
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2007.02.014
蛋白折叠液相色谱法(PFLC)用于变性蛋白质复性并同时纯化时对流动相组成及其洗脱条件的要求远较通常的液相色谱法高.用端基为PEG-200的高效疏水作用色谱固定相对重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)进行纯化并同时复性,详细研究了流动相组成、梯度洗脱模式和流速对rhIFN-γ质量回收率和活性的影响.分别以3.0 mol/L(NH4)2SO4+0.05 mol/L KH2PO4(pH 7.0)和0.05 moL/L KH2PO4(pH 7.0)为流动相A和B,采用35 min非线性梯度洗脱时,所得rhlFN-γ的质量回收率最高.
关键词:
高效疏水作用色谱法
,
流动相组成
,
梯度洗脱模式
,
纯化
,
复性
,
质量回收率
,
重组人干扰素-γ
吴丹
,
高栋
,
白泉
,
耿信笃
色谱
doi:10.3321/j.issn:1000-8713.2008.02.014
用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ,(rhIFN-γ).为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhlFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究.色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4.用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108IU/mg.用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%.用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3 x 107IU/mg.结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法.
关键词:
重组人干扰素-γ
,
蛋白折叠液相色谱法
,
高效疏水色谱
,
复性
,
纯化
