马成
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潘一廷
,
张琪
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王继峰
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钱小红
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应万涛
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.05043
蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白.针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物.然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率.本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型.在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8％).本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段.
关键词:
超滤辅助样品制备
,
亲水相互作用色谱
,
反相色谱
,
N-糖基化蛋白
,
N-糖
白海红
,
范超
,
沈丙权
,
田芳
,
邓玉林
,
潘一廷
,
秦伟捷
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.11022
蛋白质的 N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关，是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质，且糖链结构具有高度微不均一性，这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合（ SI-ATRP ）法，以带有双键的氨基葡萄糖为单体（GMAG），成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料（pGMAG-SiO2）。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层，该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度，而且显著提高了其亲水性，因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象，考察了该填料对N-糖链的富集效果，并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白 N-糖链的富集检测，共鉴定了47种糖型。以上结果表明，pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性，可以用于 N-糖链的高覆盖率鉴定。
关键词:
表面引发-原子转移自由基聚合反应
,
核壳型硅胶填料
,
N-糖链
,
N-糖基化蛋白质
