许静静
,
刘幸
,
周虎
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.08047
蛋白质翻译后修饰(PTMs)是调节细胞内生理活动的重要途径.该文总结了近年来PTMs蛋白质组学相关的分离方法,包括反相(RP)色谱法、离子交换(IEX)色谱法、亲水相互作用色谱(HILIC)法、多孔石墨化碳(PGC)色谱法、毛细管电泳(CE)法及分子筛色谱(SEC)法等.这些新方法为磷酸化、乙酰化、糖基化等PTM肽段或蛋白质的鉴定提供了更高的分离度和灵敏度.此外,该文也介绍了蛋白质领域其他重要分离方法的研究进展,这些方法可能被进一步应用于PTMs蛋白质组学的研究中.
关键词:
翻译后修饰
,
蛋白质组学
,
反相色谱
,
离子交换色谱
,
亲水相互作用色谱
,
多孔石墨化碳色谱
,
毛细管电泳
郝颖
,
王荣
,
尹强
,
谢华
,
李文斌
,
贾正平
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04045
胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一.近年来寻找肿瘤相关特异蛋白质是蛋白质组学研究的热点.本文通过考察毛细管动态涂层方法、筛分介质聚环氧乙烷(PEO)的浓度、缓冲液的pH值、分离电压、温度及荧光染料对分离效果的影响,建立了毛细管电泳-激光诱导荧光法分离胃癌组织及癌旁正常组织蛋白质的方法；通过分离检测,获得两者的蛋白质指纹图谱.经分析,两者的指纹图谱相似度达到0.8以上,差异蛋白质分子质量集中在50 000 ～100 000 Da之间,提示某些小分子蛋白质可能是和肿瘤发生相关的特异蛋白质,从而缩小了特异性分子标记物的筛选范围.病理组织学分型及蛋白质电泳峰数目的统计结果验证了该方法的可靠性.该方法具有临床应用的潜力.
关键词:
毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
蛋白质
,
差异性
,
胃癌组织
,
癌旁正常组织
汪勇
,
高培峰
,
赵新颖
,
屈锋
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03052
建立了毛细管电泳表征多肽和糖蛋白稳定性的方法.分别以血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和植物血球凝集素(PHA)、牛凝血酶(B-Thr)、人凝血酶(H-Thr)、辣根过氧化物酶(HRP)4种糖蛋白为多肽和糖蛋白的模式分子.从样品浓度、电泳缓冲液、样品溶液pH和离子强度等方面优化了血管紧张素Ⅱ的分离分析条件;从毛细管的选择、样品的电荷状态、电泳缓冲液的选择和分离电压的影响等方面讨论了糖蛋白的分离条件.Ang Ⅱ和4种糖蛋白的稳定性试验结果表明:Ang Ⅱ可在pH 7.4的硼酸盐缓冲液(0.02 mol/L)中于4℃下稳定放置48 h;4种糖蛋白可在pH 7.4硼酸盐缓冲液(0.2 mol/L)中于20,4,-20℃下稳定放置48 h;放置时间大于一周且小于四周时,在-20℃下各蛋白质均保持稳定;放置时间大于两周且小于四周时,只有HRP在上述3个温度下均保持稳定.该方法具有高效、快速、简单、低成本的特点,可广泛应用于多肽和蛋白质的稳定性表征.
关键词:
毛细管电泳
,
多肽
,
糖蛋白
,
稳定性
石冬琴
,
王荣
,
谢华
,
田薇
,
贾正平
,
郭建魁
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2012.12023
通过对PCR扩增的76例结直肠癌组织及癌旁正常组织DNA基因组共152个样本纯化变性后,采用毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)结合单链构象多态性(SSCP)分析方法检测了人结直肠癌组织及癌旁正常组织中K-ras基因第12/13位密码子突变.所检测的76例结直肠癌患者中有30例患者存在基因突变,并对异常片段进行测序验证,测序证实以碱基G→A点突变为主.结果表明所建立的CE-LIF技术结合SSCP分析检测K-ras基因突变的方法高效、快速、灵敏、准确,适合于临床上大样本结直肠癌中K-ras基因突变分析,对选择抗结直肠癌药物有一定的指导作用.
关键词:
毛细管电泳
,
K-ras基因
,
单链构象多态性
,
基因突变
,
结直肠癌组织
张倩倩
,
张雪佩
,
张含智
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.04032
发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法.CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能.共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立.特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽.同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性.与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本.
关键词:
毛细管电泳
,
激光诱导荧光检测
,
蛋白激酶抑制剂筛选
,
选择性评价
张文慧
,
姜廷福
,
吕志华
,
王远红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.05050
建立了基于离子液体的单滴微萃取-毛细管电泳联用测定溴酚类化合物的方法.考察了萃取剂种类与体积、萃取时间、有机溶剂、盐浓度及萃取温度对萃取效率的影响.确定了最佳萃取条件为:以1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C4MIM][PF6])离子液体作为萃取剂,萃取时间为8 min,样品溶液中NaCl浓度为10％(质量分数),萃取温度为20℃.在最佳条件下,3种溴酚(4-溴酚、2,6-二溴酚和2,4,6-三溴酚)在1 ～ 100 mg/L范围内呈良好的线性关系,线性相关系数为0.993 9 ～0.998 8;检出限为0.3 mg/L(S/N=3);该方法对3种溴酚的富集倍数分别为115.8、327.0和569.8;6次平行测定的相对标准偏差为5.21％ ～6.47％;对本地区自来水、河水和湖水的加标同收率为87.8％ ～ 96.7％.结果表明,该方法稳定可靠,适合于水体中溴酚类污染物的测定.
关键词:
离子液体
,
单滴微萃取
,
毛细管电泳
,
在线联用
,
溴酚
,
水
周贤婧
,
师彦平
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.05027
采用毛细管电泳-间接紫外检测法同时分离测定蜂蜜中的赖氨酸、色氨酸、谷氨酸等9种氨基酸.考察了磷酸浓度、进样方式和缓冲液pH对分离效率和重现性的影响.在分离电压为-15 kV、检测波长为220 nm条件下,以含有0.5 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵、20 mmol/L烟酸、10％甲醇的10 mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(pH10.2)为运行缓冲液,9种组分在11 min内达到基线分离;检出限最低可达到0.3 mg/L;线性范围为1.0～1 000mg/L;日间及日内精密度为0.64％ ～ 5.83％.实际样品中除甲硫氨酸外的8种氨基酸的加标回收率为60.00％～118.37％.将该方法应用于不同蜜源植物和产地的蜂蜜样品的测定,在市售的5种蜂蜜中均检测到脯氨酸、丝氨酸和天冬氨酸,而只在荔枝蜜中检测到苏氨酸.该方法可以为蜂蜜的蜜源鉴别及质量评估提供借鉴方法.
关键词:
毛细管电泳
,
间接紫外检测
,
氨基酸
,
蜂蜜
张艳梅
,
康经武
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.03013
发展了毛细管电泳(CE)和高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)相结合的用于天然产物中活性成分筛选和鉴定的方法.该方法中,用HPLC半制备柱对天然产物粗提物进行分离纯化,再用CE对HPLC纯化后的组分进行活性测试.根据HPLC-MS/MS提供的二级质谱数据,即可确定活性成分的化学结构.以乙酰胆碱酯酶为实验模型,对我们发展的筛选方法进行了验证.从黄连粗提物中确定了药根碱、巴马汀等7种活性成分,并通过CE测定了它们的半抑制率(IC50)值.与传统的天然产物分离纯化和活性筛选方法相比,该方法具有简单、微量、快速、准确的优点.本文建立的方法为天然产物粗提物中活性成分的筛选提供了新技术.
关键词:
毛细管电泳
,
高效液相色谱-质谱
,
活性成分
,
天然产物
,
药物筛选
包日煌
,
范清杰
,
宋珑
,
姚远
,
高卫平
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.11010
应用毛细管电泳技术建立了人血清蛋白质毛细管电泳分析方法,对比了正常人与肝硬化患者血清蛋白质含量的差异.使用异硫氰酸荧光素(FITC)进行荧光标记,并考察光源与滤光片的波长、缓冲液的浓度、pH值、分离电压对分离效果的影响.建立了毛细管电泳-发光二极管诱导荧光法检测肝硬化患者血清及正常人血清蛋白质的方法;通过分离检测,获得了两者的蛋白质电泳谱图.经分析,在肝硬化患者的血清蛋白质中比在正常人的血清蛋白质中多检测到2个蛋白质峰,可能是和肝硬化发生相关的特异蛋白质;肝硬化患者与正常人的血清蛋白质电泳谱图的差异有统计学意义.该方法能实现人血清蛋白质的分离,可为临床诊断肝硬化做参考.
关键词:
毛细管电泳
,
发光二极管诱导荧光检测
,
血清蛋白质
,
差异
,
肝硬化
