郝斐然
,
付斌
,
张养军
,
钱小红
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2015.09010
基于电迁移的蛋白质制备技术是对一类分离和制备技术的统称，其特征是在电场的作用下对目标物质进行分离和纯化制备，这种技术在生物大分子和蛋白质组的研究中应用广泛。基于电迁移的制备技术主要包括制备型电泳、制备型电色谱、制备型等电聚焦和自由流电泳等。本文对每种制备型电迁移装置的设计、特点和基于该种装置的各种应用方法的优缺点进行了详细阐述，并列举了一些实例。另外，微量级制备型电泳因分离度高、回收率高以及高效快速的优点，在微量级生物样本分析中发挥着日益重要的作用，近年来备受关注，本文也着重关注了这方面的进展，并对基于电迁移的制备技术做了展望。
关键词:
电迁移制备技术
,
制备型电泳
,
制备型电色谱
,
制备型等电聚焦
,
自由流电泳
,
微量级制备型电泳
,
蛋白质
,
综述
刘春叶
,
许旭
,
张剑
,
陈杰瑢
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2010.00296
在自制的聚二甲基硅氧烷(PDMS)微芯片上,使用十二烷基磺酸钠(SDS)无胶筛分电泳分离体系(10 g/L 的羟乙基纤维素(HEC),1 g/L 的SDS,40 mmol/L 磷酸盐缓冲溶液,pH 7.0),采用在线自校正激光诱导荧光检测方法,在6.4 min内高效分离了异硫氰酸荧光素(FITC)衍生的6种蛋白质标准样品,连续6次电泳所得迁移时间的相对标准偏差(RSD)均小于10% .用自主建立的脱氧核糖核酸(DNA)定量分离模型对蛋白质迁移数据进行拟合,发现SDS-蛋白质复合物迁移规律与DNA相似,但迁移淌度与相对分子质量及电场强度之间的线性关系明显变差,可见原DNA分离模型要扩展到蛋白质范围必须对一些参数进行校正.
关键词:
自制微芯片
,
电泳
,
蛋白质
,
脱氧核糖核酸
,
迁移规律
张权青
,
张磊
,
高小迪
,
张维冰
,
张庆合
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2014.09019
发展了一种大体积循环进样方法，用于富集低丰度蛋白质。在优化的色谱分离条件下，通过增加蛋白质样品的上样体积提高低丰度蛋白质的绝对含量；进一步采用增加样品进样循环次数的方法提高蛋白质的富集效率。以猪肝提取蛋白质为样品，每次上样量500μL 的大体积11次循环进样。根据色谱峰的信号强弱，选择了在原始谱图中看不到色谱峰、有较少小峰和有较多小峰出现的时间段等有代表性的馏分进行研究。在中等极性的组分中，保留时间为11.38 min 和12.58 min 组分的富集效率分别提高了52倍和61倍，实验结果与理论富集效率相近。所发展的方法为生物蛋白质样品研究提供了一种新的富集制备及检测方法。
关键词:
大体积进样
,
循环
,
蛋白质
,
低丰度
,
猪肝
,
富集
黄志
,
洪广峰
,
高明霞
,
张祥民
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.10020
构建了一种在线阵列式二维常规柱液相色谱系统，并将其应用于分离血浆中的完整蛋白质。该系统以1根强阴离子交换柱作为第一维分离柱，8根阵列式反相色谱柱作为第二维分离柱。强阴离子交换柱分离的馏分通过十通阀被依次转移到第二维预柱上并得到保留富集，随后第二维流动相通过分流器同时将预柱上的蛋白质反冲至分析柱上进行分离。二维之间以及第二维阵列色谱柱之间均相互独立，从而可以提高系统分离的通量和总峰容量。采用该系统对血浆中的蛋白质进行了完整蛋白质水平上的分离。该系统具有高通量和高分辨率的特点，为血浆样品中高丰度蛋白质的去除以及血浆样品的深入研究提供了一种有效的手段。
关键词:
阵列二维色谱
,
在线
,
蛋白质
,
血浆
,
蛋白质组学
李佳斌
,
周廉淇
,
颜辉
,
李楠楠
,
郝斐然
,
田芳
,
张养军
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2013.11042
建立了金属标记结合高效液相色谱-选择性离子监测质谱（SIM）的蛋白质绝对定量新方法。实验考察了金属标记效率、金属标记的稳定性、标记后肽段的色谱保留和质谱行为、新定量方法的线性范围和准确度。实验结果表明金属标记具有标记效率高，稳定性好，色谱保留行为一致等优点。另外，金属标记-选择离子监测质谱绝对定量方法灵敏度高，其定量限低至1 fmol，线性范围为1~500 fmol，线性范围内 R2值大于0.99，具有良好的线性关系；经过测量，标准肽段的回收率为117.01％，说明该方法具有较高的准确度。将该方法应用于腾冲嗜热菌中烯醇酶蛋白的定量分析，相对标准偏差为5.47％，表明该方法的精密度高。以上结果表明该方法可以用于生物样本中的蛋白质的绝对定量分析，为比较简单的生物样本中蛋白质的绝对定量方法提供了一种新的选择。
关键词:
金属标记
,
高效液相色谱
,
选择离子监测质谱
,
蛋白质
,
绝对定量
苏日娜
,
谢明雪
,
李海杰
,
邓启良
色谱
doi:10.3724/SP.J.1123.2016.02015
通过一步合成法制备了两种可聚合季铵盐离子液体功能单体，并通过沉淀聚合法合成了相应的聚离子液体聚合物。对产物进行了核磁共振、扫描电镜、热重分析等表征。结果表明：所制备的两种材料粒径均匀，约为600 nm的椭球形颗粒，颗粒之间有相互粘连。通过对牛血清白蛋白（ BSA）、卵清蛋白（ OVA）、牛血红蛋白（ BHb）、溶菌酶（ Lys）、胰蛋白酶（ Try）5种蛋白质的吸附性能实验，考察了聚季铵盐离子液体材料对蛋白质的吸附性能。考察结果表明：两种聚离子液体材料均对蛋白质具有一定的吸附性能。其中以4-乙烯基苄氯季铵盐离子液体为功能单体制备的聚离子液体材料对胰蛋白酶的吸附性能最好，是一种具有良好应用前景的材料。
关键词:
季铵盐
,
离子液体
,
聚离子液体材料
,
蛋白质
